人NADH-细胞色素b5还原酶ELISA试剂盒双抗体夹心法(检测未知抗原)

人NADH-细胞色素b5还原酶ELISA试剂盒双抗体夹心法(检测未知抗原) 

1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。



2、加样：加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。



3、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。



4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。



5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml



6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。




若实验结果呈现阳性，则需进一步确认其特异性及准确性。此时，可尝试采用其他检测方法如Western blot或质谱分析进行交叉验证，以排除假阳性结果的可能性。同时，回顾实验过程，确保每一步操作均严格按照说明书执行，避免操作失误导致的误差。

此外，对于呈阴性的样本，也不可掉以轻心。特别是在疾病早期或患者免疫力较低的情况下，抗原浓度可能过低，导致无法被试剂盒有效检测。因此，对于疑似病例，建议结合临床症状、病史及多种检测结果进行综合判断。

在实验结束后，及时整理实验数据，记录实验过程中的关键步骤及观察结果。对于异常或不符合预期的结果，进行深入分析，找出可能的原因，并调整实验方案或条件，以提高后续实验的准确性和可靠性。

总之，人NADH-细胞色素b5还原酶ELISA试剂盒双抗体夹心法作为一种灵敏、特异的检测手段，在生物医学研究中发挥着重要作用。然而，其结果的解读需结合多方面因素，以确保准确性和可靠性。