小鼠胚胎干细胞CE3（干细胞库保藏）培养冷冻保存细胞之方法：

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞冻存步骤：

资源名称　小鼠胚胎干细胞CE3（干细胞库保藏）培养
种属:CE3

类型:小鼠胚胎内细胞团

形态:球形*

培养方法

培养基:mES完全培养液配方（600 ml）： DMEM (Invitrogen 12430) 497 ml ES级FBS (biochrom S4115) 90 ml Glutamax (Invitrogen 35050) 6 ml NEAA (Invitrogen 11140) 6 ml LIF (Millipore ESG1107) 60 μl（终浓度为1000U/ml） β-Mer (Invitrogen 21985) 1.5 ml 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度。
细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：产品仅用于科研
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养过程：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
以下是小鼠胚胎干细胞CE3（干细胞库保藏）培养的相关热销产品：
隐色孔雀石绿（标准品）质量规格：分析标准品Leucomalachite Green  rabbitC-ReactiveProtein,CRPELISA试剂盒兔子C反应蛋白(CRP)ELISA试剂盒规格：96T/48T  可溶性CD30配体(sCD30L)ELISA试剂盒 ，英文名： sCD30L ELISA Kit

二十酸甲酯（标准品）质量规格：≥98.0%(GC)Methyl Arachidate  小鼠雌激素受体β(ERβ)ELISA试剂盒 ，英文名： ERβ ELISA Kit  ratEndothelin1,ET-1ELISA试剂盒大鼠内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒规格：96T/48T

反式玉米素质量规格：>99%,BR,可用于细胞培养trans-Zeatin  人优球蛋白(EL)ELISA检测试剂盒HumanEuglobulinLysis,ELELISAKit 96T/48T  HumandipeptidylpeptldaseⅣ,DPPⅣELISA试剂盒人二肽基肽酶Ⅳ(DPPⅣ)ELISA试剂盒规格：96T/48T

氯亚铂酸钾 质量规格：BR,铂含量 ≥46%,原始铂粉度＞99.95% Dipotassium tetrachloroplatinate  大鼠卵泡抑素(FS)试剂盒 Rat Follistatin,FS ELISA Kit  HumanHeatShockProtein40，HSP-40ELISAKit人热休克蛋白40(HSP-40)ELISA试剂盒规格：96T/48T
小鼠着丝粒蛋白H(CENPH)ELISA试剂盒 ，英文名： CENPH ELISA Kit  异连翘苷规格  Isoforsythiaside

内皮细胞生长因子受体-3(VEGFR-3)ELISA检测试剂盒MonkeyVascuoarendothelialcellgrowthfactorreceptor,VEGFR-3ELISAkit 96T/48T  6817-41-0异莲心碱   Isoliensinine

犬缪勒管抑制物质/抗缪勒管激素(MIS/AMH)试剂盒 Canine Mullerian Inhibiting Substance/Ai-Mullerian Hormone,MIS/AMH ELISA Kit  2450-53-5异绿原酸A说明书  Isochlorogenic acid A

英文名称HumanniicoxidesyhaseELISAKIT人合成酶(NOS)ELISA试剂盒规格：96T/48T  14534-61-3异绿原酸B品牌  Isochlorogenic acid B

化微粒体1脂酶D(PhospholipaseD)总活性荧光定量检测试剂盒20  32451-88-0异绿原酸C规格  Isochlorogenic acid C
27215-14-1新穿心莲内酯规格  Neoandrographolide    英文名称Ratt-PAELISAKit大鼠组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)规格：96T/48T

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27210-57-7新丹参酮   miltirone  英文名称RattotalhemolyticcomplemeELISAKit大鼠总溶血补体(CH50)规格：96T/48T

27210-57-7丹参新酮说明书  Miltirone   英文名称RattotalhemolyticcomplemeELISAKit大鼠总溶血补体(CH50)规格：96T/48T

27208-80-6虎杖苷品牌  Polydatin   英文名称RatTissuePolypeptideAigenELISAKit大鼠组织多肽抗原(TPA)ELISAKit规格：96T/48T
小鼠胚胎干细胞CE3（干细胞库保藏）培养小鼠载脂蛋白H(APOH)ELISA试剂盒 ，英文名： APOH ELISA Kit  28831-65-4紫草酸规格  lithospermic acid

猴可溶性细胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA检测试剂盒Monkeysolublevasccularcelladhesionmolecule1,sVCAM-1ELISAKit 96T/48T  81907-62-2灵芝酸A   Ganoderic Acid A

犬结缔组织生长因子(CTGF)试剂盒 Canine connective tissue growth factor,CTGF ELISA Kit  33783-82-3HederacolchisideE说明书  Hederacolchiside E

英文名称HumahrombomodulinELISAKit人调节蛋白(TM)ELISA试剂盒规格：96T/48T  68027-15-64补充中2品牌  hederagenin 3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-(β-D-glucopyranosyl(1→4))-α-L-arabinopyranoside

化线粒体冻存液(酶学和膜结构保护)50毫升  848784-87-24补充中3规格  Lup-20(29)-en-28-oic acid, 3-[ D-glucopyranosyl(1→4)[ L-rhamnopyranosyl) (1→2)-L-arabinopyranosyl]oxy], (3,4)-)
收到小鼠胚胎干细胞CE3（干细胞库保藏）培养处理方法
产品仅用于科研1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。