人EB病毒转化的B细胞培养冷冻保存细胞之方法：

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞冻存步骤：

资源名称　人EB病毒转化的B细胞培养
种属:CGM1

类型:淋巴母细胞

形态:淋巴细胞样

培养方法

培养基:RPMI-1640(GIBCO,货号31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, glucose 2.5g/L, Sodium Pyruvate 0.11g/L)，90%；胎牛血清，10%。 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度。

生长特性:悬浮生长
细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：产品仅用于科研
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养过程：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
以下是人EB病毒转化的B细胞培养的相关热销产品：
硬脂酸丁酯(>Butyl stearate质量规格：>98%，BR  小鼠雄激素受体(AR)ELISA试剂盒 ，英文名： AR ELISA Kit  ELISAKitTAFI小鼠纤溶抑制因子规格：48T/96T

C10E6，10%溶液C10E6质量规格：BR  小鼠活化蛋白C(APC)ELISA检测试剂盒MouseactivatedproteinC,APCELISAKit 96T/48T  Humancalmodulin，CAMELISAKit人钙调素(CAM)ELISA试剂盒规格：96T/48T

C12E10，10%溶液C12E10质量规格：BR  人黄体生成素(LH)试剂盒 Human leinizing hormone,LH ELISA kit  人凝胶原蛋白(gelson)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

C12E9, 10%溶液C12E9质量规格：BR  RatComplemefragme5a,C5aELISAKit大鼠补体片断5a(C5a)ELISA试剂盒规格：96T/48T  小鼠胃动素(MTL)试剂盒 Mouse Motilin,MTL ELISA Kit
小鼠脂蛋白a(Lpa)ELISA试剂盒 ，英文名： Lpa ELISA Kit  13241-33-3新橙皮苷规格  Neohesperidin

猴抗抗体(LMA)ELISA检测试剂盒Monkeyai-livercellmembraneaibody,LMAELISAKit 96T/48T  27210-57-7新丹参酮   miltirone

犬凝聚素(CLU)试剂盒 Dog clusterin,CLU ELISA Kit  906-33-2新绿原酸说明书  Neochlorogenic acid

英文名称HumanInsulin-likegrowthfactorbindingprotein2,IGFBP2ELISAKIT人胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFBP2)规格：96T/48T  64809-67-2新芒果苷品牌  Neomangiferin

化人体RUNX3基因重组表达载体(pCMV5-RUNX3)10微克  93772-31-7新藤黄酸规格  Neogambogic acid
32619-42-4橄榄苦苷规格  Oleuropein   鱼类组织元素荧光定量检测试剂盒20

32451-88-0异绿原酸C规格  Isochlorogenic acid C  鱼类主要组织相容性复合体(MHC)ELISA检测试剂盒Fishmajorhistocompatibilitycomplex,MHCELISAKit 96T/48T

32449-98-2Khasianine品牌  Khasianine   鱼类受精卵细胞冻存试剂盒(低温)50

31721-94-55,7-二羟基色原酮说明书  5,7-dihydroxychromone   鱼类三甲状腺原氨酸(T3)ELISA检测试剂盒Fishi-iodothyronine,T3ELISAKit 96T/48T

31524-62-6异补骨脂二氢黄酮   Isobavachin   鱼类皮质醇(Coisol)ELISA检测试剂盒FishCoisolELISAKit 96T/48T
人EB病毒转化的B细胞培养小鼠内皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA检测试剂盒MouseEndothelialniicoxidesyhase3,eNOS-3ELISAKit 96T/48T  63902-38-5松酯醇二葡萄糖苷品牌  Pinoresinol diglucoside

人聚集蛋白(Agrin)试剂盒 Human Agrin ELISA Kit  113146-74-0酸浆苦味素L规格  Physalin L

Ratadrenergicalpha-1Areceptor,ADRA1AELISAKit大鼠能a1A受体(ADRA1A)ELISA试剂盒规格：96T/48T  55466-04-1酸枣仁皂苷A   Jujuboside A

载玻片细胞TSH-BETA蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20  55466-05-2酸枣仁皂苷B说明书  Jujuboside B

Mouse25-DihydroxyvitaminD3,HVD3ELISA试剂盒小鼠25羟基维生素D3(25(OH)D3/25HVD3)ELISA试剂盒规格：96T/48T  194851-84-8酸枣仁皂苷D品牌  Jujuboside D
收到人EB病毒转化的B细胞培养处理方法
产品仅用于科研1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。