牦牛皮肤细胞培养冷冻保存细胞之方法：

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞冻存步骤：

资源名称　牦牛皮肤细胞培养
种属:BMU-S1

形态:成纤维细胞样

培养方法

培养基:DMEM-H:Dulbecco＇sModifiedEagle＇sMedium(DMEH-214.5g/LiterGlucose)15%NBS

生长特性:贴壁生长
细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：产品仅用于科研
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养过程：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
以下是牦牛皮肤细胞培养的相关热销产品：
鱼藤酮质量规格：>90%,BRRotenone  英文名称MouseCCL24ELISAKit小鼠CCL24规格：96T/48T  大鼠粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA试剂盒 ，英文名： MUC5B ELISA Kit

7-表紫杉醇（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品7-Epitaxol  冰冻切片组织衰老特异性晚期脂褐素铁还原法(SCHMORL)染色试剂盒50  人抗核糖体P蛋白抗体(ARPA/Rib-P)ELISA检测试剂盒Humanai-ribosomalPproteinaibody,ARPA/Rib-PELISAKit 96T/48T

澳洲茄胺;澳州茄胺（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Solasodine  Ratepidermalgrowthfactorreceptor,EGFRELISA试剂盒大鼠表皮生长因子受体(EGFR)ELISA试剂盒规格：96T/48T  大鼠白介素7(IL-7)试剂盒 Rat Ierleukin-7,IL-7 ELISA kit

紫花前胡苷（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Nodakenin  小鼠白介素17(IL17)ELISA试剂盒 ，英文名： IL17 ELISA Kit  CLIAKitfoGFBeta2ELISAKit大鼠转化生长因子β2规格：48T/96T
小鼠脂联素(human adiponectin)ELISA试剂盒 ，英文名： human adiponectin ELISA Kit  2034-69-7西瑞香素规格  Daphnoretin

牛的牛血清白蛋白残留检测ELISA检测试剂盒Bovinerudimealbovineserumalbumincheck-upELISAKit 96T/48T  177931-17-8三白草酮   Sauchinone

人AP-5复合物β亚基(PP1030)试剂盒 human PP1030 ELISA Kit  71610-00-9三尖杉宁碱说明书  Cephalomannine

英文名称MouseIL-2sRαELISAkit小鼠白介素2可溶性受体α链(CD25)(IL-2sRα)规格：96T/48T  5302-45-4三七素品牌  dencichine

冰冻切片总胆高氯酸萘醌(PAN)染色试剂盒50  三七皂苷Fc规格  Notoginsenoside Fc
470-17-7异土木香内酯说明书  isoalantolactone  真菌/酵母细胞总RNA分离试剂盒20

4684-32-6鸭脚树叶碱说明书  2α,5α-Epoxy-1,2-dihydroakuammilan-17-oic acid methyl ester   真菌/酵母细胞线粒体分离(活性)试剂盒10

467-55-0海柯皂苷元规格  Hecogenin   真菌/酵母细胞线粒体分离(粗提)试剂盒10

466-26-2雪上一枝蒿乙素品牌  BullatineB  真菌/酵母细胞线粒体DNA萃取试剂盒10/20

466-24-0苯甲酰乌头原碱   Benzoylaconitine   真菌/酵母细胞细胞壁分离试剂盒20
牦牛皮肤细胞培养人精氨酸酶2(ARG2)试剂盒 Human ARG2 ELISA Kit  104-46-1反式茴香脑说明书  cis-Anethol

Ratangiopoietieceptoie1,ANG-R-Tie1ELISAKit大鼠生成素受体Tie1(ANG-R-Tie1)ELISA试剂盒规格：96T/48T  3,6′-二芥子酰基蔗糖品牌  3, 6′-Disinapoyl Sucrose

载玻片细胞有丝分裂NBT显色检测试剂盒10/20  人参皂苷Rk1规格  Ginsenoside Rk1

MouseAlanineAminoansferase,ALT/GPTELISA试剂盒小鼠氨酸转氨酶/谷转氨酶(ALT/GPT)ELISA试剂盒规格：96T/48T  人参皂苷Rg6   Ginsenoside Rg6

小鼠载脂蛋白B100(Apo B100)ELISA试剂盒 ，英文名： Apo B100 ELISA Kit  130567-83-8罗汉果苷III说明书  Mogroside III
收到牦牛皮肤细胞培养处理方法
产品仅用于科研1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。