昆明白小鼠胚胎成纤维细胞（干细胞库保藏）形态冷冻保存细胞之方法：

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞冻存步骤：

资源名称　昆明白小鼠胚胎成纤维细胞（干细胞库保藏）形态
种属:昆明白MEF

类型:取孕12.5天的昆明白小鼠的胚胎制备获得

形态:成纤维细胞

培养方法

培养基:MEF细胞完全培养基（100 ml）： DMEM (Invitrogen, 12430) 88 ml FBS (Biochrom, S4115) 10 ml Glutamax (Invitrogen, 35050) 1 ml Non-essential Amino Acids, 100×(Invitrogen, 11140) 1 ml 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度。
细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：产品仅用于科研
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养过程：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
以下是昆明白小鼠胚胎成纤维细胞（干细胞库保藏）形态的相关热销产品：
知母皂苷BII（标准品）Timosaponin BII质量规格：HPLC≥98%，标准品  人抗促甲状腺素受体抗体(Ab)试剂盒 human thyroid stimulating hormone receptor aidoby,Ab ELISA Kit  人紧张素转化酶(ACE)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

2',3'-二脱氧鸟苷(ddG)2',3'-Dideoxyguanosine质量规格：>97%,进分  rabbitthyroxine,T4ELISAKit兔子甲状腺素(T4)ELISA试剂盒规格：96T/48T  猪神经型合成酶(nNOS)试剂盒 Pig Neuronal Niic Oxide Syhase,nNOS ELISA Kit

知母皂苷E(标准品)Anemarsaponin E质量规格：HPLC≥98%，标准品  载玻片细胞CDK6蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20  HumanCollageypeⅠ,ColⅠELISAKit 人Ⅰ型胶原(ColⅠ)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

植酸(标准品)Phytic acid质量规格：UV≥98%，标准品  Humanβai-galactanproteinsIgGELISA试剂盒人β乳糖蛋白抗体IgGELISA试剂盒规格：96T/48T  Humanmalondialchehyche,MDAELISA试剂盒人二(MDA)ELISA试剂盒规格：96T/48T
犬β内啡肽(β-EP)ELISA检测试剂盒CanineBeta-Endorphin,β-EPELISAKit 96T/48T  104-46-1反式茴香脑品牌  Anethole

犬胸腺肽α1(Thymosin α1)试剂盒 Canine Thymosin α1 ELISA Kit  33889-68-8防己诺林碱规格  Fangchinoline

英文名称HumaissuefactorELISAKit人组织因子(TF)ELISA试剂盒规格：96T/48T  518-34-3粉防己碱   Tetrandrine

超敏型HRP-TMB底物显色试剂盒10/50  19906-72-0蜂斗菜内酯说明书  Bakkenolide

Ratglucocoicoid,GCELISA试剂盒大鼠内源性糖皮质激素(GC)ELISA试剂盒规格：96T/48T  484-20-8佛手柑内酯品牌  Bergapten；5-Methoxypsoralen
64809-67-2新芒果苷品牌  Neomangiferin  组蛋白H2B-K46甲基化(di)检测试剂盒10/20等

64657-21-2异佛司可林   Isoforskolin   组蛋白H2B-K16乙酰化检测试剂盒10/20等

64461-95-6胡黄连苷III品牌  Picroside III   组蛋白H2B-K12乙酰化检测试剂盒10/20等

64439-81-210-羟基喜树碱品牌  10-Hydroxycamptothecin   组蛋白H2B-K120乙酰化检测试剂盒10/20等

64421-28-9山栀苷甲酯说明书  Shanzhiside methylester   组蛋白H2A-T1291酸化检测试剂盒10/20等
昆明白小鼠胚胎成纤维细胞（干细胞库保藏）形态产气荚膜梭菌α(Closidiumperfringenscpa)鉴定16SrDNAPCR扩增检测试剂盒20  865-21-4长春花碱说明书   Vinblastine

RatFreeProstateSpecificAigen,fPSAELISA试剂盒大鼠游离特异性抗原(fPSA)ELISA试剂盒规格：96T/48T  71486-22-1长春瑞滨品牌  Vinorelbine

小鼠组蛋白H3(H3)ELISA试剂盒 ，英文名： H3 ELISA Kit  57-22-7长春新碱规格  Vincristine

山羊坏死因子α(TNF-α)ELISA检测试剂盒GoatTumornecrosisfactorα,TNF-αELISAKIT 96T/48T  2468-21-5长春质碱   Catharanthine

犬叶酸(FA)试剂盒 Canine Folic acid,FA ELISA Kit  14216-03-6常春藤苷C说明书  Hederacoside C
收到昆明白小鼠胚胎成纤维细胞（干细胞库保藏）形态处理方法
产品仅用于科研1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。