黑化大家鼠形态冷冻保存细胞之方法：

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞冻存步骤：

资源名称　黑化大家鼠形态
种属:NRm

形态:成纤维细胞样

培养方法

培养基:M-199:withEarle＇sBalancedSaltsSolution(EBSS)15%NBS

生长特性:贴壁生长
细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：产品仅用于科研
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养过程：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
以下是黑化大家鼠形态的相关热销产品：
SkMC Pellet 人骨骼肌细胞团块 > 1 mio.cells 人基质细胞cDNAHHGMC cDNAN-苄基甘酸乙酯，英文名或英文缩写：N-Benzylglycine etxyl ester，级别：BR，97%，规格：25克

CL-0090Hacat(人永生化角质形成细胞)5×106cells/瓶×2胆碱氧化酶 Choline oxidase (≥10 units/mg) 9028-67-5 50UN 通用试剂

MBL2 Others Human 人 MBL2 / MBL / COLEC1 CHO细胞裂解液 (阳性对照) N-alpha-芴氧羰基-N-in-叔丁氧羰基-L-色安醋 Fmoc-Trp(Boc)-OH 14384-78-6

人神经细胞裂解物HNLL-pxenYLALANINEL-本美国药典级5kg

牛肾细胞;MDBK 人咽鳞癌细胞，FaDu细胞 Nb2-11细胞，小鼠瘤细胞硅酮　OV-7Silicone OV-7
4. 细胞系统避蚊胺(99%)DEET质量规格：0.99

CL-0439SK-CO-1(人结直肠腺癌细胞)5×106cells/瓶×2特丁通(标准品)Terbumeton质量规格：分析标准品

人细胞;Hela P10s-11F 大鼠外膜成纤维细胞完全培养基 100mL噻呋酰胺(分析标准品,96%)Thifluzamide质量规格：分析标准品,96%

4T1 小鼠癌细胞速灭威(标准品)Tsumacide质量规格：分析标准品

ECM1 Others Mouse 小鼠 ECM1 人细胞裂解液 (阳性对照) 特丁津(标准品)Terbuthylazine质量规格：分析标准品
HLF-a(人肺细胞) 5×106cells/瓶×2 藤黄微球菌/腾黄八叠球菌胺蓝Oshēng huà shì jì容量：2～8°C1克

管内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)2,3-二氧基本全 2,3-Dimqthoxybqnzcldqhydq 86-21-1

FGF2 Others Human 人 VEGF121 / VEGF-A 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 炭疽杆菌shēng huà shì jì容量：1米

人非小细胞;NCI-H2087雾抑制剂shēng huà shì jì容量：2～8℃1毫克

CCD-1095Sk细胞，皮肤细胞 人细胞,HHCC细胞 CL-0176OP9(小鼠骨髓基质细胞)5×106cells/瓶×252092-43-02-溴-4-硝基　N-氧，97%2-Bromo-4-nitnopyridine 1-oxide
黑化大家鼠形态AMY2A Others Human 人 AMY2A / Alpha-amylase 人细胞裂解液 (阳性对照) 胆戊基碳酸酯Cholesterol Amyl Carbonate质量规格：

人肝动脉内皮细胞完全培养基 100mL胆正辛基碳酸酯Cholesterol n-Octyl Carbonate质量规格：

NFS-60细胞，小鼠细胞G-CSF依赖性 HeLa [ Chang Liver ](张氏肝细胞) 非洲绿猴肾细胞;BS-C-1胆己基碳酸酯Cholesterol Hexyl Carbonate质量规格：

XCL2 Protein Human 重组人 XCL2 蛋白 (His 标签)4-(4-乙氧苯氧羰基)苯基碳酸戊酯(>95.0%(HPLC))Amyl 4-(4-Ethoxyphenoxycarbonyl)phenyl Carbonate质量规格：>95.0%(HPLC)

PK-15(猪肾细胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 / 恒河猴 CCN3 / NOV Baculovirus-Insect cells ansfected Lysate (positive corol) (denatured)碳酸丁基4-羧苯酯(>98.0%(T))Butyl 4-Carboxyphenyl Carbonate质量规格：>98.0%(T)
收到黑化大家鼠形态处理方法
产品仅用于科研1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。