大鼠海绵体内皮细胞培养冷冻保存细胞之方法：

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞冻存步骤：

资源名称　大鼠海绵体内皮细胞培养
分离基物海绵体组织

提供形式:5×105cells/T25细胞培养瓶

安全等级:1

模式菌株:未知

培养方法

培养基:M199、FBS、内皮细胞生长添加剂、Heparin、Ascorbic Acid、Hydrocortisone、Penicillin、Streptomycin 我们推荐使用大鼠海绵体内皮细胞专用完全培养基作为体外培养大鼠海绵体内皮细胞的培养基。
细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：产品仅用于科研
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养过程：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
以下是大鼠海绵体内皮细胞培养的相关热销产品：
非洲绿猴肾细胞系/HCV-NS3;Vero-HCV-NS3溴酚蓝质量规格：INDBromophenol blue

FCGR2 Others Mouse 小鼠 CD32 / FCGR2B 人细胞裂解液 (阳性对照) 固蓝B质量规格：BSFast Blue B Salt

细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)脱落酸,S-诱抗素; 壮芽灵质量规格：95%,BRAbscisic acid,S-ABA

RBBP4 Others Human 人 RBBP4 / RBAP48 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 胃蛋白酶(1:3000)质量规格：1:3000,BRPEPSIN

人细胞;SF767核糖核酸酶A(sigma)质量规格：≥50 U/mg,sigma 原装Ribonuclease A from bovine pancreas
EPHA4 Others Human 人 EPHA4 人细胞裂解液 (阳性对照) 阿斯巴甜质量规格：>98%,BRAspartame

Hacat 人永生化角质细胞克拉维酸钾质量规格：标准品Potassium clavulanate

CM-R115大鼠小梁网细胞完全培养基100mL刺槐素质量规格：>98%，标准品ROBININ

MDA-MB-231(ATCC来源), 人癌细胞质量规格：>98.0%，进口Amfebutamone

EB病毒转化的人B细胞;KMY0920 人皮肤肥大细胞完全培养基 100mL维生素B2（标准品）质量规格：HPLC≥99%，标准品vitamin B2
HOS细胞，人细胞 皱褶青霉 人胚肺细胞系;KuMA氧化亚铜500克

TE-10(人细胞) 5×106cells/瓶×2BOC-Nim-苄基-L-组... BOC-Nim-benzyl-L-Histidine,≥98.0% 20898-44-6 1G 通用试剂

HMy2.CIR(人B母细胞) 5×106cells/瓶×2 mOPC, 小鼠少突胶质前体细胞 人皮肤成纤维细胞;HSAS4异丁安;1-安基;2-基炳安 IsobutylcMinq;1-cMinoisobutcnq;2-Mqthyl propylcMinq 78-81-9

人膀胱上皮永生化细胞;SV-HUC-11,3-二溴本5克RT，避光

CSF1R Others Rat 大鼠 CSF1R / MCSF Receptor / CD115 人细胞裂解液 (阳性对照) 141-32-2酸丁酯n-Butyl acrylate;2-Propenoic acid butyl ester
大鼠海绵体内皮细胞培养HuH-7人细胞 Human苦苏花皂苷CCussosaponin C质量规格：HPLC≥98%，标准品

CLU Others Mouse 小鼠 CLU / Clusterin 人细胞裂解液 (阳性对照) 常春藤苷CHederacoside C质量规格：HPLC≥98%，标准品

人肾近曲小管上皮细胞RNAHRPTEpiC miRNA5 μgHederacolchiside EHederacolchiside E质量规格：HPLC≥98%，标准品

LTF Others Human 人 LTF / Lactoferrin / Lactoansferrin 人细胞裂解液 (阳性对照) 3-O-β-D-葡萄糖( 1→3)- a -L-鼠李糖(1→2)- a-L-阿拉伯糖 齐墩果酸– 28-O-鼠李糖(1→4)葡萄糖(1→6)葡萄糖苷V质量规格：HPLC≥98%，标准品

Panc10.05 *腺癌3-O-b-D-葡萄糖( 1→4)-[ a -L-鼠李糖(1→2)]- a-L-阿拉伯糖 23-羟基羽扇豆20(29)-1-28–酸- 28-O-鼠李糖(1→4)葡萄糖(1→6)葡萄糖苷V质量规格：HPLC≥98%，标准品
收到大鼠海绵体内皮细胞培养处理方法
产品仅用于科研1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。