细胞培养过程：

产品仅用于科研冷冻保存细胞之方法：
曲妥珠单抗（赫塞汀）耐药的人细胞培养冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

资源名称　曲妥珠单抗（赫塞汀）耐药的人细胞培养
种属:BT-474/HR

形态:上皮样

培养方法

培养基:MEM-EBSS:MinimumEssentialMedium(MEMEagleswithEarle＇sBalancedSalts)10%FBS

生长特性:贴壁生长

细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞冻存步骤：

细胞培养步骤：
产品仅用于科研一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

收到曲妥珠单抗（赫塞汀）耐药的人细胞培养处理方法
1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。
以下是曲妥珠单抗（赫塞汀）耐药的人细胞培养的相关热销产品：
大鼠前脂肪细胞完全培养基 100mL依帕司他质量规格：>99%Epalrestat

B16-F0小鼠色素瘤细胞 B16-F0 mouse melanoma cells DMEM+10% FBS盐酸表阿霉素质量规格：>98%,BREpirubicin HCl

IFNA4 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IFNA4 / IFNα4 / Ierferon alpha-4 蛋白 (Fc 标签)硝呋酚；硝呋奇特质量规格：>99%Nifuroxazide

KATO III(人细胞) 5×106cells/瓶×2 败毒梭菌Closidium septicum硝呋酚；硝呋奇特(标准品)质量规格：HPLC>99%,标准品Nifuroxazide

肠微内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)千金藤素质量规格：HPLC ≥98%,BRCepharanthine
FAM3B Others Human 人 FAM3B 人细胞裂解液 (阳性对照) 透明质酸钠；玻璃酸钠质量规格：>95%,蛋白≤0.1% hyaluronate

小鼠成年表皮角质形成层细胞完全培养基 100mL质量规格：>98%,BR,可用于细胞培养Hydrocortisone

YAC-1小鼠瘤细胞 YAC-1 mouse lymphoma cells RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS格列吡嗪 （标准品）质量规格：HPLC>98%,标准品Glipizide

IL17RD Protein Canine 重组狗 IL17RD 蛋白 (His 标签)盐酸多奈哌齐I型质量规格：含量98.0-102%,I型Donepezil HCl

人脉络丝表皮细胞 (HCPEpiC)( 5×105 ) 人脐带血单个核细胞 Saos-2，人成细胞雌酚酮/雌酮质量规格：>98%,USP32Estrone
气管平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)盐酸氟奋乃静（标准品）质量规格：供HPLC法含量测定用FLUPHENAZINE

Y2细胞，小鼠成纤维细胞 人顺铂耐药株,COC1/CDDP细胞 人食道上皮细胞裂解物HEEpiCL鸦胆子苦醇(标准品)质量规格：HPLC>98%,标准品(+)-Brusatol

非洲绿猴肾细胞;CV-1盐酸哌唑嗪（标准品）质量规格：含量测定Prazosin HCl

IGFBP3 Others Human 人 IGFBP3 / IBP3 人细胞裂解液 (阳性对照) 7-羟基质量规格：≥97%,BR7-Hydroxycoumarin

兔角膜前基质层成纤维细胞;RCFBF吡罗昔康-d3质量规格：美国进口Piroxicam-d3
曲妥珠单抗（赫塞汀）耐药的人细胞培养CM-R074大鼠心肌成纤维细胞完全培养基100mL酪氨酸脱羧酶Tyrosine decarboxylase质量规格：>0.1 U/mg,BC

GES-1细胞，人胃粘膜细胞 人神经上皮瘤细胞,SH-SY5Y细胞 大额牛与婆罗门牛杂交F1代皮肤成纤维样细胞;BOS-5维多利亚蓝 RVictoria blue R质量规格：染料含量：>80%,BS

CoC1(人细胞) 5×106cells/瓶×2α-酮戊二酸单钾盐(>α-Ketoglutaric acid potassium salt质量规格：>98%，BR

PVR Others Human 人 PVR / CD155 / NECL5 人细胞裂解液 (阳性对照) 1-环己基二乙酸单酰胺(>1,1-Cyclohexanediacetic acid monoamide质量规格：>98%，BR

人肾透明细胞癌;Caki-11,2-乙二硫醇(>98.5%，BR)1,2-Ethanedithiol质量规格：>98.5%，BR