发绿色荧光的小鼠胚胎干细胞培养冷冻保存细胞之方法：

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞冻存步骤：

资源名称　发绿色荧光的小鼠胚胎干细胞培养
种属:G1

形态:上皮细胞样

培养方法

培养基:RPMI1640(w/oHepes)10%FBS

生长特性:贴壁生长
细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：产品仅用于科研
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养过程：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
以下是发绿色荧光的小鼠胚胎干细胞培养的相关热销产品：
THPO Protein Mouse 重组小鼠 Thrombopoietin / THPO / TPO 蛋白 (His 标签)CHAPSO；3-[(3-胆氨丙基)二甲基氨基]-2-羟基-1-丙磺酸质量规格：>99%,分子生物学级；CHAPSO

人张氏肝细胞;Chang liver 人上皮细胞完全培养基 100mL二硫赤藓醇(DTE)；1,4-二硫代赤藓醇质量规格：>99%,进分sigma1,4-Dithioerythritol

Saos-2，人成细胞精噁唑禾草灵(标准品)质量规格：分析标准品Fenoxaprop-P

ART4 Others Cynomolgus 食蟹猴 ART4 人细胞裂解液 (阳性对照) 6-羟基烟酸(分析标准品,≥98.0%(HPLC))质量规格：分析标准品,≥98.0%(HPLC)6-Hydroxynicotinic Acid

人胚;MRC-5正庚醇(分析标准品,99.8%（GC))质量规格：分析标准品,99.8%（GC)1-Heptanol
CM-H076人心房肌细胞完全培养基100mL4-甲基伞形酮酰-alpha-D-吡喃糖苷质量规格：分子生物学级MU-alpha-GAL

OSM Others Mouse 小鼠 Oncostatin M / OSM 人细胞裂解液 (阳性对照) 粘酸(>98%，BC)质量规格：>98%，BCMucic acid

小鼠角膜内皮细胞完全培养基 100mL碲标准溶液(100μg/ml，基体:HCI)质量规格：100μg/ml，基体:HCITellurium standard

NCI-H929-UBC-EGFP(稳定株)人细胞 NCI-H929-UBC-EGFP (stable sain) human myeloma cell 1640+20% FBS(热灭活)铥标准溶液(1000μg/mL,基体：10%HCL)质量规格：1000μg/mL,基体：10%HCLThulium standard

IL25 Protein Human 重组人 IL25 蛋白 (Fc 标签)钒标准溶液(500mg/L,溶剂：水)质量规格：500mg/L,溶剂：水Vanadium standard
LRIG1 Others Mouse 小鼠 LRIG1 / LIG-1 人细胞裂解液 (阳性对照) L-鼠李糖；鼠李糖一水质量规格：≥98%，BRL(+)-Rhamnose monohydrate

MOLT-4 人急性母细胞细胞鼠尾草酚(标准品)质量规格：HPLC≥95%，标准品Carnosol

NCI-H1975人 Human lung adenocarcinoma cell line NCI-H1975 RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS鼠尾草酸（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Carnosic acid

ADIPOQ Protein Mouse 重组小鼠 Adiponectin / Acrp30 / ADIPOQ 蛋白 (His 标签)双去氧基姜黄素(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Bisdemethoxycurcumin

SV-40转化;WI38/VA13 人胰岛β细胞完全培养基 100mLL-犬尿氨酸(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品L-Kynurenine
发绿色荧光的小鼠胚胎干细胞培养人间充质干细胞-脐带磺胺-5-甲氧嘧啶(98%)Sulfameter质量规格：>98%

人胚胎，皮肤，肌肉;M-20 人外周血白细胞完全培养基 100mL双甲脒（标准品）Amitraz质量规格：HPLC>98%,分析标准品

人脐动脉平滑肌细胞HUASMC双甲脒Amitraz质量规格：>97%,BR

EPCAM Others Rat 大鼠 EpCAM / OP-1 / TACSTD1 人细胞裂解液 (阳性对照) 柠檬酸一水Citric acid monohydrate质量规格：>99%,AR

大鼠食管上皮细胞完全培养基 100mLSalubrinalSalubrinal质量规格：>98%,eIF2α选择性抑制剂
收到发绿色荧光的小鼠胚胎干细胞培养处理方法
产品仅用于科研1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。