小鼠培养冷冻保存细胞之方法：

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞冻存步骤：

资源名称　小鼠培养
种属：P19

类型：胚胎；畸胎癌

形态：上皮细胞

培养方法

培养基：MEMα+培养基：(GIBCO,货号11900024，添加NaHCO3 1.5g/L，肌醇 43.2mg/L, 叶酸 8.82mg/L,β-巯基乙醇 7.8mg/L)，90%；BCS，7.5%；胎牛血清，2.5%。 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度。

生长特性：贴壁生长
细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：产品仅用于科研
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养过程：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
以下是小鼠培养的相关热销产品：
人细胞;RPMI-8226 [RPMI8826]24-冠8-(>93.0%(GC))24-Crown 8-Ether质量规格：>93.0%(GC)

293T/17细胞，SV40T转化的人胚肾细胞(亚系) 鼠小脑细胞,C8-D1A细胞 CL-0259BC-020(人癌细胞)5×106cells/瓶×2二苯并-18-冠-6-(>99.0%(GC))Dibenzo-18-crown 6-Ether质量规格：>99.0%(GC)

ZR-75-30(人癌细胞) 5×106cells/瓶×216-DOXYL-硬脂酸自由基(>95.0%(HPLC)(T))16-DOXYL-stearic Acid Free Radical质量规格：>95.0%(HPLC)(T)

HBSMC-c 人类平滑肌细胞(HBSMC) 500,000cells *真皮成纤维细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)CLA (>98.0%(HPLC))CLA质量规格：>98.0%(HPLC)

Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)MCLA (>98.0%(HPLC))MCLA质量规格：>98.0%(HPLC)
LCN2 Others Mouse 小鼠 LCN2 / NGAL 人细胞裂解液 (阳性对照) 胆壬酸酯(>89.0%(GC))质量规格：>89.0%(GC)Cholesterol Pelargonate

3T3-L1, 小鼠前脂肪细胞胆壬基碳酸酯质量规格：Cholesterol Nonyl Carbonate

B2M Others Rat 大鼠 B2M / Beta-2-microglobulin 人细胞裂解液 (阳性对照) 胆庚基碳酸酯质量规格：Cholesterol Heptyl Carbonate

大鼠海马神经元细胞完全培养基 100mL胆油醇碳酸酯(>70.0%(HPLC))质量规格：>70.0%(HPLC)Cholesterol Oleyl Carbonate

MDCK(NBL-2)狗肾细胞 MDCK (NBL-2) dog kidney cells MEM(GIBCO)+10%FBS熊果苷质量规格：≥98%，BRArbutin
HA Others H7N9 甲型 H7N9 (A/Hangzhou/1/2013) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人细胞裂解液 (阳性对照) eetonitnILEWITH0.1%GLACIALACETIC以,含0.1%HPLC级透明无色液体RT不sigma

CL-0289MDA-MB-435(人癌高转移细胞)5×106cells/瓶×21,3,5-三肖基本;队称三肖基本 1,3,5-Trinitnobqnzqnq;syM-Trinitnobqnzqnq;Bqnzit;TNB 99-32-4

TT细胞，髓性细胞 人成巨核细胞细胞,MEG-01细胞 人急性母细胞性细胞;MOLT-4言醋哌卡应 Mqpivcccinq xy7nochloridq 2017/6/9

4T1(小鼠癌细胞) 5×106cells/瓶×2矢车菊苷，英文名或英文缩写：Kuromanin chloride，级别：BR，99%，规格：20/240ug/支

MME Others Human 人 CD10 / MME / Neprilysin 人细胞裂解液 (阳性对照) 28697-53-2D-阿拉伯糖D(-)-Arabinose
小鼠培养CL-0327Calu-6(人肺退行性癌细胞)5×106cells/瓶×2鸟嘌呤硫酸盐Guanine Sulfate质量规格：>98.0%，进口原装

P3-X63-Ag8细胞，细胞 人T细胞细胞,A3细胞 EB病毒转化的人B细胞;KMY0909腺嘌呤盐酸盐Adenine 质量规格：>98%,BR

5637(人细胞) 5×106cells/瓶×2肌苷；核苷Inosine质量规格：>98.5%,BR

FCGR2A Others Human 人 CD32a / FCGR2A 人细胞裂解液 (阳性对照) 肌苷(标准品)Inosine质量规格：HPLC>98%,标准品

人整合SV40基因的上皮细胞;HBL-100 [HBL100]5‘-腺嘌呤核苷酸二钠盐(AMP2Na)5'-AMP-Na2质量规格：>98%,BR
收到小鼠培养处理方法
产品仅用于科研1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。