人细胞培养冷冻保存细胞之方法：

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞冻存步骤：

资源名称　人细胞培养
种属：8305C

提供形式：T25细胞培养瓶/冻存管

模式：菌株未知

培养方法

培养基：90%高糖DMEM+10%FBS

生长条件：95%空气+5%二氧化碳37摄氏度

生长特性：贴壁生长

存储条件：50%高糖DMEM+40%FBS+10%DMSO 液氮
细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：产品仅用于科研
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养过程：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
以下是人细胞培养的相关热销产品：
谷胱甘肽过氧化物酶分析试剂盒GPX7-差向 10-去乙酰基紫衫醇7-Epi 10-Desacetyl Paclitaxel质量规格：美国进口

TLK2 Others Human 人 TLK2 / PKU-ALPHA (aa 397-772 ) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) (S,S)-帕洛诺司琼盐酸盐-d4(S,S)-Palonosetron  Labeled d4质量规格：美国进口

人结直肠腺癌细胞;COLO 320DM [COLO320DM]2'-O-(2-甲氧乙基）腺苷2'-O-(2-Methoxyethyl)adenosine质量规格：美国进口

CBRH-7919细胞，细胞 人未分化细胞,HGC-27细胞 牛陀螺状细胞;BT(S)-腺苷，环3',5'-（氢化硫代1酸酯）三乙基胺(S)-Adenosine, cyclic 3',5'-(hydrogenphosphorothioate) triethylammonium 质量规格：美国进口

tTA基因修饰的小鼠*癌细胞(B类);Pan02-CAG-tTA-4C52'-脱氧-β-L-腺苷2'-Deoxy-β-L-adenosine  质量规格：美国进口
MFC-GFP(小鼠前细胞(绿色荧光蛋白标记)) 5×106cells/瓶×2噻奈普汀酸;噻奈普汀质量规格：>98%,BRTianeptine

B16(小鼠色素瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 CM-R107大鼠海马神经元细胞完全培养基100mL EB病毒转化的人B细胞;KMY0920噻奈普汀酸;噻奈普汀(标准品)质量规格：HPLC>99%,标准品Tianeptine

CM-H031人食管上皮细胞完全培养基100mL醋酸恩夫韦地 质量规格：BR,>98%Enfuvirtide Acetate

B18R Others Vaccinia Virus 牛痘病毒 B18R / B19R 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) D-海藻糖无水质量规格：≥99%,BRD-(+)-Trehalose Anhydrous

细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)二醋酸戈那瑞林(LH-RH)质量规格：>98%,二醋酸盐Gonadorelin Acetate
ECE2 Others Human 人 ECE-2 人细胞裂解液 (阳性对照) 2-溴芴(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)2-Bromofluorene

人正常上皮细胞;RWPE-12-溴-9-芴酮(>96.0%(GC))质量规格：>96.0%(GC)2-Bromo-9-fluorenone

人肺动脉内皮细胞(HPAEC) ( 5×105 )2-溴-9,9-二甲基芴(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)2-Bromo-9,9-dimethylfluorene

CL-0333E.G7-OVA(小鼠T瘤细胞)5×106cells/瓶×22,7-二氨基芴(>98.0%(HPLC))质量规格：>98.0%(HPLC)2,7-Diaminofluorene

人导管癌细胞;HCC38 大鼠关节软骨细胞完全培养基 100mL9-溴-10-苯基蒽(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)9-Bromo-10-phenylanthracene
人细胞培养山羊皮肤细胞;WGS1齐墩果酸Oleanolic acid质量规格：HPLC≥95%，BR

CAMK4 Others Mouse 小鼠 CAMK4 / CaMKIV 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 齐墩果酸(高98%）Oleanolic acid质量规格：HPLC≥98%，BR

CL-0137NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Sain L](小鼠成纤维5×106cells/瓶×2齐墩果酸(标准品）Oleanolic acid质量规格：HPLC≥98%,标准品

HGC-27人细胞 细胞，HelaS3细胞 ES-2(卵巢透明细胞癌细胞)莽草酸Shikimic acid质量规格：≥98%,BR

人小细胞;NCI-H2227莽草酸(标准品)Shikimic acid质量规格：HPLC≥98%，标准品
收到人细胞培养处理方法
产品仅用于科研1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。