细胞培养过程：

产品仅用于科研冷冻保存细胞之方法：
人说明书冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

资源名称　人说明书
种属：NEC8

类型：贴壁生长

形态：CM5-1培养液中，贴壁，上皮细胞样，多角形、梭形

分离基物：睾丸胚胎性癌；男性

提供形式：复苏形式：T25培养瓶1瓶；或者冻存形式：2ml冻存管2支，干冰费另计。

安全等级：1

模式：菌株未知

培养方法

传代方法：将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约2min取出。传代用12mL CM5-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分3~6皿培养；

生长条件：37℃，5%CO2，CM5-1培养液。CM5-1培养液：90%Mc Coy’s 5a+10%FBS。Mc Coy’s 5a：Mc Coy’s 5a培养液。

存储条件：冻存则用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。

细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞冻存步骤：

细胞培养步骤：
产品仅用于科研一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

收到人说明书处理方法
1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。
以下是人说明书的相关热销产品：
HNE2-LMP1/2细胞，人细胞系 小鼠细胞,H22细胞 CM-H071人肾动脉平滑肌细胞完全培养基100mL4-硝基儿茶酚4-NITROCATECHOL质量规格：>98.0% ，进口分装

OS-RC-2(人细胞) 5×106cells/瓶×2曲格列酮Troglitazone(CS-045)质量规格：>98%,BR

Promocell C-27101 Chondrocyte Growth Medium, 软骨细胞生长培养基(即用型) 500ml2-氨基-4'-氟二苯甲酮2-Amino-4'-fluorobenzophenone 质量规格：>98%

骨骼肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)2-氨基-4'-氯二苯甲酮2-amino-4'-chlorobenzophenone 质量规格：大于98%，化学

WIF1 Others Mouse 小鼠 WIF1 / WIF-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 原百部碱(标准品)Protostemonine质量规格：HPLC≥98%，标准品
MMP8 Others Mouse 小鼠 MMP8 / CLG1 CHO细胞裂解液 (阳性对照) 尿嘧啶（标准品）质量规格：含量测定Uracil

EB病毒转化的人B细胞;KM9801溴丙胺肽林（标准品）质量规格：HPLC法含量测定Propantheline bromide

豹猫肺成纤维样细胞;LCL1 张氏肝细胞，HeLa[Chang Liver]细胞 LLC-PK1细胞，猪肾细胞盐酸妥洛特罗（标准品）质量规格：HPLC法含量测定Tulobuterol

人;HFL1无水1酸氢二钠（标准品）质量规格：含量测定N-(Isoxazol-5-yl)sulphanilamide

HA Others H6N1 甲型 H6N1 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) 尿嘧啶 质量规格：>99%,可用于细胞培养Uracil
MN-c, 小鼠皮质神经元DG-18琼脂25毫升2～8℃

小鼠神经干细胞BOC-D-天冬酸 Boc-Asp-OH,99% 13726-67-5 1G 通用试剂

人胚胎，皮肤，肌肉;M-22 人食管上皮细胞完全培养基 100mL布洛芬 Ibuprofqn 12687-7-1

人间充质干细胞(脂肪)cDNAHMSC-ad cDNAMFC培养基1米

TNFSF11 Others Human 人 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 人细胞裂解液 (阳性对照) 1400-62-0地衣红ORCEIN
人说明书CFSC-2G细胞，大鼠肝星形细胞 7721(7721细胞) tTA基因修饰的小鼠*癌细胞(B类);Pan02-CAG-tTA-3E6前列地尔，素E1Alprostadil,PGE1,质量规格：>95%,BR,USP30

EFNB3 Protein Rat 重组大鼠 Ephrin-B3 / EFNB3 蛋白 (His 标签)四1雌酮,1丙孕素Altrenogest质量规格：> 99%

Y1(Y-1) (小鼠肾上腺皮质细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠细胞;L1210四1雌酮,1丙孕素(标准品)Altrenogest质量规格：HPLC>98%,标准品

山羊肾上皮样细胞;DG-K1盐酸金刚烷胺Amantadine HCl质量规格：>98%,BR

人膀胱基质成纤维细胞(HBdSF)(5×105)盐酸金刚烷胺（标准品）Amantadine HCl质量规格：HPLC>98%,标准品