人表皮癌细胞说明书冷冻保存细胞之方法：

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞冻存步骤：

资源名称　人表皮癌细胞说明书
种属：A-431

类型：皮肤；上皮；

形态：上皮细胞

培养方法

培养基：含1.5g/L 碳酸氢钠， 4.5g/L 葡萄糖，4mM L-谷氨酰胺的DMEM，90%；胎牛血清或新生牛血清，10%。或Ham's F12 + 10% 胎牛血清.
细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：产品仅用于科研
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养过程：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
以下是人表皮癌细胞说明书的相关热销产品：
EJ(人细胞) 5×106cells/瓶×2 肺大平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)芍药苷(50%)Paeoniflorin质量规格：≥50%,BR

间充质干细胞脂肪细胞分化培养基MADM-prf芍药苷(90%)Paeoniflorin质量规格：≥90%

CDCP1 Others Mouse 小鼠 CDCP1 人细胞裂解液 (阳性对照) 5,6-二甲基-1,10-菲咯啉(>98.0%(T))5,6-Dimethyl-1,10-phenanthroline质量规格：>98.0%(T)

大鼠完全培养基 100mL2,9-二丁基-1,10-邻二氮杂菲(>96.0%(HPLC))2,9-Dibutyl-1,10-phenanthroline质量规格：>96.0%(HPLC)

CTLA4 Ig-24细胞，中国仓鼠卵巢细胞 SK-OV-3 [SKOV-3](人细胞) CM-H002人肺大动脉内皮细胞完全培养基100mL2,9-二苯基-1,10-菲咯啉(>98.0%(HPLC)(T))2,9-Diphenyl-1,10-phenanthroline质量规格：>98.0%(HPLC)(T)
QGY-7701(人细胞) 5×106cells/瓶×2 大鼠 EphA3 人细胞裂解液 (阳性对照) 醋酸组氨瑞林 Histrelin Acetate质量规格：BR,度>98%

人结直肠腺癌细胞;COLO 205青霉素V钾Penicillin V potassium salt质量规格：1440~1680 U/mg,BR

CD47 Others Human 人 CD47 人细胞裂解液 (阳性对照) 2'-脱氧肌苷2'-deoxyinosine质量规格：>98%,BR

mEPC, 小鼠内皮祖细胞-骨髓盐酸尼非卡兰Nifekalant 质量规格：>98%,BR

3T3TK细胞，小鼠成纤维细胞 TNFa转染耐VP16绒癌细胞,JEG-3-VP16-TNFa细胞 人滑膜细胞RNAHS miRNA5 μg盐酸尼非卡兰(标准品)Nifekalant 质量规格：HPLC>99%,标准品
CL-0046C4-2(人细胞)5×106cells/瓶×25--2-脱氧胞苷25克

HSC-T6, 大鼠肝星状细胞系6-溴己醋 6-BroMohqxcnoic ccid;6-BroMoccproic ccid 44-70-8

EB病毒转化的人B细胞(彝族);HYL 人腹膜内皮细胞完全培养基 100mLSILVERnitnATE肖酸银蛋白组学级25GRT

牛脑垂体提取物BPE丽春红2R100克2～8°C

EPHB2 Others Mouse 小鼠 EphB2 / Hek5 人细胞裂解液 (阳性对照) POPSO 10g/100g原装 Sigma P3405
人表皮癌细胞说明书EB病毒转化的人B细胞;KMY0909 人软骨细胞完全培养基 100mL头孢呋辛钠(标准品)Cefuroxime  质量规格：效价测定

水牛皮肤成纤维样细胞;WB-S5头孢曲钠Ceftriaxone  质量规格：potency>980ug/mg,BR

IFNB1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNB1 / IFN-beta / Ierferon beta 人细胞裂解液 (阳性对照) 头孢曲钠（标准品）Ceftriaxone  质量规格：HPLC>98%,标准品

CL-0197RL95-2(人细胞)5×106cells/瓶×2头孢他啶(含碳酸钠)Ceftazidime with  Carbonate 质量规格：94.0-105.0%,USP,BR

Hut-78细胞，皮肤T细胞瘤 人平滑肌,T/G细胞 人低侵袭性脉络膜色素素瘤细胞;OCM-1A头孢唑啉钠Cefazolin 质量规格：>95%,BR
收到人表皮癌细胞说明书处理方法
产品仅用于科研1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。