人细胞培养冷冻保存细胞之方法：

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞冻存步骤：

资源名称　人细胞培养
种属：A549（A-549）

类型：贴壁生长

形态：上皮样细胞

分离基物：人，肺

模式：菌株未知

培养方法

培养基：90%高糖DMEM+10%FBS

生长条件：95%空气+5%二氧化碳 37摄氏度

存储条件：50%高糖DMEM+40%FBS+10%DMSO 液氮
细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养过程：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
以下是人细胞培养的相关热销产品：
脑动脉平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)苝(升华提)(>99.0%(GC))Perylene (purified by sublimation)质量规格：>99.0%(GC)

CA46细胞，人Butts瘤细胞系 小鼠Lewis瘤株,LLT细胞 人肝脏星形细胞裂解物HHSteCL1,1,4,4-四苯基-1,3-丁二1(>99.0%(HPLC))1,1,4,4-Tetraphenyl-1,3-butadiene质量规格：>99.0%(HPLC)

NCI-H295R(人肾上腺皮质腺癌细胞) 5×106cells/瓶×28-羟基米氮平β-D-葡萄糖苷酸8-Hydroxy Mirtazapine β-D-Glucuronide质量规格：美国进口

CCRF-CEM(人急性细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0094HCC827(人非小细胞细胞)5×106cells/瓶×2 小鼠树突状细胞低转移细胞(绿色荧光蛋白标记);DG6-GFP8-羟基米氮平8-Hydroxy Mirtazapine质量规格：美国进口

绿色荧光蛋白标记小鼠前细胞;MFC-GFPN,N-二乙酰 去-5'-氯-4-氟代苄基莫沙必利N,N-Diacetyl Des-5'-chloro-4-fluorobenzyl Mosapride质量规格：美国进口
SK-BR-3细胞，人癌细胞 草鱼肾细胞系,GIK细胞 肺大平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)氯己定(标准品)质量规格：分析标准品,99.5%Chlorhexidine

WL1(大鼠肺细胞) 5×106cells/瓶×2香茅醇(分析标准品,≥99.0%(GC))质量规格：分析标准品,≥99.0%(GC) β-Citronellol

NHDF Pellet 正常人皮肤成纤维细胞团块(少年者) > 1 mio.cells 1酸(pNPP)1酸酶检测试剂盒pNPP多菌灵标准溶液(100μg/ml,u=3%)质量规格：100μg/ml,u=3%Carbendazim solution

CL-0251MC3T3-E1(小鼠胚胎成骨细胞前体细胞)5×106cells/瓶×2Cbz-L-苏氨酸苄酯质量规格：0.98N-Cbz-L-threonine Benzyl Ester

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Hut-102(人皮肤T瘤细胞) 5×106cells/瓶×2(R)-(+)-4'-羟苯基卡维地洛质量规格：美国进口(R)-(+)-4'-Hydroxyphenyl Carvedilol

Promocell C-22020 Endothelial Cell GrowthMedium MV, 内皮细胞生长培养基MV(即用型) 500ml4'-苄氧基卡维地洛质量规格：美国进口4'-Benzyloxy Carvedilol

人食道上皮细胞裂解物HEEpiCL卡维地洛-甲基-d3质量规格：美国进口Carvedilol-methyl-d3

HEXA Others Human 人 Hexosaminidase A / HEXA Subunit A 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 卡维地洛β-D-葡萄糖苷酸(mixture of diasteromers)质量规格：美国进口Carvedilol β-D-Glucuronide (mixture of diasteromers)

人结直肠腺癌细胞;HCT-15 [HCT15](S)-(-)-1-苯乙醇(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)(S)-(-)-2-Methyl-1-butanol
人细胞培养大鼠肾系膜细胞;RMC塞来昔布羧酸Celecoxib Carboxylic Acid质量规格：美国进口

中国仓鼠卵巢细胞(亚系*);CHO-HCV-NS2 细胞，HeLa 229细胞 EAC-E2G8细胞，鼠腹水瘤4'-反式-羟基西洛他唑4'-trans-Hydroxy Cilostazol质量规格：美国进口

人胚胎心肌组织来源细胞;CCC-HEH-23,4-脱氢西洛他唑3,4-Dehydro Cilostazol质量规格：美国进口

POSTN Others Mouse 小鼠 POSTN / OSF2 人细胞裂解液 (阳性对照) 西洛他唑-d11Cilostazol-d11质量规格：美国进口

胃粘膜上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)去二甲基氯化西酞普兰盐酸盐Didemethylchloro Citalopram 质量规格：美国进口
收到人细胞培养处理方法
1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。