人急性早幼粒细胞培养冷冻保存细胞之方法：

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞冻存步骤：

资源名称　人急性早幼粒细胞培养
种属:NB4

类型:悬浮生长

形态:CM2-1培养液中，悬浮，淋巴母细胞样，圆形，少数聚团生长

提供形式:复苏形式：15ml离心管1支；或者冻存形式：2ml冻存管2支，干冰费另计。

安全等级:1

模式菌株:未知

培养方法

培养基:90%RPMI-1640+10%FBS

传代方法:将培养好的悬浮细胞轻轻吹打均匀，分配至3~6个新鲜培养液皿中，轻轻摇匀后放入培养箱培养；

生长条件:37℃，5%CO2，CM2-1培养液。CM2-1培养液：90%RPMI-1640+10%FBS。RPMI-1640：1640培养液，含谷氨酰胺。

存储条件:将悬浮细胞转移至离心管中，(110g，3min)离心，离心完成后用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）重悬细胞，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。
细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养过程：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
以下是人急性早幼粒细胞培养的相关热销产品：
小鼠色素瘤细胞;B16L-天冬氨酸二甲酯盐酸盐L-Aspartic acid dimethyl ester 质量规格：>98%,BR

中国仓鼠卵巢细胞(亚系*);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ1 Cdna-TGF-β1 Dinding Protein cDNA 细胞，Hepa 1-6细胞 M145细胞，猴肾C细胞CBZ-D-缬氨酸N-Cbz-D-valine质量规格：0.98

人胚肺二倍体细胞;KMB-17Z-Arg(Mtr)-OH·CHAZ-Arg(Mtr)-OH·CHA质量规格：0.98

JAM3 Others Mouse 小鼠 JAM3 / JAM-C 人细胞裂解液 (阳性对照) CBZ-L-赖氨酸甲酯盐酸盐;N(ε)-苄氧羰基-L-赖氨酸甲酯盐酸盐H-Lys(Z)-OMe 质量规格：HPLC>98%

脑微内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)N-CBZ-D-丙氨酸Z-D-Ala-OH质量规格：>98%,BR
TNFRSF10B Others Mouse 小鼠 AILR2 / TNFRSF10B 人细胞裂解液 (阳性对照) 固绿FCF质量规格：BSFast Green FCF

CM-M048小鼠肠巨噬细胞完全培养基100mL子种绿A；蓝A质量规格：BSAlphazurine A

PROC Others Mouse 小鼠 PROC1 / Protein C / PROC 人细胞裂解液 (阳性对照) 日落黄质量规格：BSSunset Yellow FCF

平滑肌细胞培养基SMCM-prf1黄；柠檬黄；酸性黄 23质量规格：BSTartrazine

TOV-112D细胞，人上皮性细胞 人肾小管近段上皮细胞,HK-2细胞 子宫内膜上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)酸性黄17质量规格：ARAcid Yellow 17
肾小球内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)CAPS; 3-(环已胺)丙磺酸质量规格：>99%CAPS

STXBP1 Others Human 人 STXBP1 / UNC18A 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 巴豆苷（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Crotonoside

小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-B6巴西苏木素（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Brazilin

T/G HA-VSMC细胞，人主动脉平滑肌细胞 人胚肝细胞正常,QSG-7701细胞 CL-0064CoC1(人细胞)5×106cells/瓶×2菝葜皂苷元（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Sarsasapogenin

人APP-PS1(M146L)双基因转染CHO细胞株;7WML6.0阿托伐他汀叔丁基酯质量规格：美国进口Atorvastatin tert-Butyl Ester
人急性早幼粒细胞培养原代成纤维细胞特制无血清添加剂Many types of cells包装：1ml腺苷 5'-1酰硫酸 钠盐Adenosine 5'-phosphosulfate  salt 质量规格：美国进口

人结直肠腺癌细胞;HT-29 大鼠细胞完全培养基 100mLN6-苯甲基-5’-乙基甲酰胺基腺苷N6-Benzyl-5'-ethylcarboxamido Adenosine 质量规格：美国进口

FO 小鼠细胞P1,P5-Di（腺苷-5'-)五1酸盐，五钠盐P1,P5-Di(adenosine-5') pentaphosphate penta salt 质量规格：美国进口

ERBB2 Others Rat 大鼠 ErbB2 / HER2 人细胞裂解液 (阳性对照) P1,P5-Di(腺苷-5'-)五1酸盐，五铵盐e pentaammonium saltP1,P5-Di(adenosine-5') pentaphosphate pentaammonium salt质量规格：美国进口

小鼠T瘤细胞(鸡OVA基因修饰);E.G7-OVAN6-苯甲基腺苷N6-Benzyl Adenosine 质量规格：美国进口
收到人急性早幼粒细胞培养处理方法
1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。