细胞培养过程：

冷冻保存细胞之方法：
绿色荧光蛋白标记人结细胞形态冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

资源名称　绿色荧光蛋白标记人结细胞形态
种属:HCT116-GFP

形态:上皮样；多角形

培养方法

培养基:IMDM:Iscove＇sModiefiedDulbecco＇sMedium10%FBS；200ug/mlG418　

生长特性:贴壁生长

细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞冻存步骤：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

收到绿色荧光蛋白标记人结细胞形态处理方法
1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。
以下是绿色荧光蛋白标记人结细胞形态的相关热销产品：
ACO1 Others Human 人 ACO1 / irp1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 羟基匹格列酮（M-Ⅳ）Hydroxy Pioglitazone (M-IV)质量规格：美国进口

兔间变表皮鳞株;VX2N-氧基帕洛诺司琼Palonosetron N-Oxide质量规格：美国进口

BxPC-3细胞，原位*腺癌细胞 鼠细胞,P3X63-Ag8.653细胞 人细胞;EC109帕珠沙星Pazufloxacin质量规格：美国进口

BALB/C小鼠肝瘤株;BNL 1ME A.7R.1培美曲塞二钠Pemetrexed Di质量规格：美国进口

SELE Others Human 人 E-Selectin / CD62E 人细胞裂解液 (阳性对照) 培美曲塞二钠-d5Pemetrexed-d5 Di Salt质量规格：美国进口
人肺微内皮细胞 (HPMEC)( 5×105 ) rRTEC, 大鼠肾小管上皮细胞 Rattus柯诺辛碱质量规格：HPLC≥95%，标准品Corynoxine

雪旺细胞生长添加物SCGS乌拉地尔(标准品)质量规格：HPLC>98%,标准品Urapidil

LILRA3 Others Human 人 ILT6 / LILRA3 人细胞裂解液 (阳性对照) 夫西地酸钠质量规格：>97%,BRFusidate

EB病毒转化的人B细胞;KMY0928夫西地酸钠(标准品)质量规格：HPLC≥98%,标准品Fusidate

CNE1细胞，人细胞(高分化) 小鼠细胞,P3-X63-Ag8.653细胞 草鱼*细胞;L8824芒果苷质量规格：≥90%,BRMangiferin
人脂肪间充质干细胞(脂肪)(HMSC-ad)(5×105)L-谷酸，英文名或英文缩写：H-Glu(OMe)-OMe.HCl，级别：特，98.0%，规格：5克

CM-R024大鼠成纤维细胞完全培养基100mL芴甲氧羰基-L-天冬... Fmoc-Asp(OtBu)-OH (HPLC,≥98.0%) 71989-14-5 5G 通用试剂

小鼠肾集合管细胞(SV40转化);M-1 小鼠小肠内皮细胞完全培养基 100mL亚铁绕啉离子还原溶液 FqRROIN 14634-91-4

CSC, 小鼠心肌细胞 Mouse4-metxoxybenzoicacid对甲氧基本酸1克高，99%

SPARC Others Mouse 小鼠 SPARC / BM-40 人细胞裂解液 (阳性对照) 姆沙伯 W HPChromosorb W-HP
绿色荧光蛋白标记人结细胞形态人角膜成纤维细胞 (HcorF)( 5×105 )顺式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六1酸(标准品)DHA质量规格：分析标准品

CM-M067小鼠肾足突细胞完全培养基100mL二甲硝咪唑(标准品)Dimetridazole质量规格：分析标准品

小鼠成肌细胞;C2C12 小鼠胰岛细胞完全培养基 100mL青霉素V钾(标准品)Penicillin V potassium salt质量规格：分析标准品

人间充质干细胞-肝 Human2-NP-AOZ(标准品)2-NP-AOZ质量规格：分析标准品

CD180 Others Human 人 CD180 / RP105 / LY64 人细胞裂解液 (阳性对照) 磺胺醋酰(标准品)Sulfacetamide质量规格：分析标准品