人细胞（2013年新引进）（干细胞库保藏）说明书冷冻保存细胞之方法：

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞冻存步骤：

资源名称　人细胞（2013年新引进）（干细胞库保藏）说明书
种属:NCI-N87

类型:胃

形态:上皮样

模式菌株:未知

培养方法

培养基:1. 人细胞NCI-N87完全培养液配方（100 ml）： 　　 RPMI 1640 Medium (Invitrogen, 11875-093) 88 ml 　　 FBS (Gibco) 10 ml Glutamax（invitrogen 35050）

传代方法:（注：该细胞贴壁较慢，建议复苏后让细胞贴壁48h后再进行后续实验操作。）

生长条件:气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37摄氏度

生长特性:贴壁生长
细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养过程：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
以下是人细胞（2013年新引进）（干细胞库保藏）说明书的相关热销产品：
STO(小鼠胚成纤维细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 IL18RAP / IL1R7 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 变色酸钠,铬变酸二钠Chromotropic acid di salt dihydrate质量规格：AR

人虹膜色素上皮细胞HIPEpiC溴百里酚蓝钠盐Bromothymol blue  salt质量规格：AR

EDA2R Others Rat 大鼠 XEDAR / EDA2R 人细胞裂解液 (阳性对照) 特地唑胺游离碱Tedizolid free base质量规格：>98%,BR

大鼠肠动脉内皮细胞完全培养基 100mL特地唑胺;特地唑胺1酸酯Tedizolid phosphate;TR-701FA质量规格：>99%;BR

CCRF-CEM [CCRF CEM]人急性细胞T细胞 The CCRF-CEM [CCRF CEM] human acute lymphoblastic leukemia T lymphocytes 1640+10%Hyclone 灭活血清3-甲基-2-苯并噻唑酮腙盐酸盐，水合MBTH  hydrate质量规格：>98%,BR
小鼠角膜成纤维细胞完全培养基 100mL氘代苯-D6(0.5ml x 10 )质量规格：D,99.5%Benzene-D6

OPM-2-CMV-EGFP(稳定株)人细胞 OPM-2-CMV-EGFP (stable sain) human myeloma cell 1640+20% FBS(热灭活)氘代苯-D6(0.55ml x 10)质量规格：D,99.5%+0.03%TMSBenzene-D6

IL21R Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 IL-21R / Ierleukin-21 Receptor 蛋白 (His 标签)氘代苯-D6(10g )质量规格：D,99.5%Benzene-D6

人脊髓星形胶质细胞(HA-sp)(1×106) 人脑微内皮细胞 Human氘代苯-D6(10g )质量规格：D,99.5%+0.03%TMSBenzene-D6

CM-H057人卵巢微内皮细胞完全培养基100mL氘代苯-D6(25g)质量规格：D,99.5%Benzene-D6
杂交瘤(B类);Z51B3C10H12A12G2F7E7 小鼠皮下脂肪细胞完全培养基 100mLD-醇（标准品）质量规格：95%，标准品D-Pinitol

HK-2, 人肾皮质近曲小管上皮细胞 Human果菊苷（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Echinacoside

MEP1A Others Human 人 MEP1A / PPHA 人细胞裂解液 (阳性对照) 萝酸(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Usnic acid

人主动脉内皮细胞裂解物HAECL酸枣仁皂苷A(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Jujuboside A

TNFSF13B Others Cynomolgus 食蟹猴 BLyS / TNFSF13B / BAFF 人细胞裂解液 (阳性对照) D-焦谷氨酸（标准品）质量规格：HPLC法有关物质检查D-Pyroglutamic acid
人细胞（2013年新引进）（干细胞库保藏）说明书HFDPC-c 人类的毛细胞(HFDPC) 500,000cells 膀胱平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)铱标准溶液(1000μg/ml,基质：2.0mol/L盐酸)Iridium standard solution质量规格：1000μg/ml,基质：2.0mol/L盐酸

平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)镍标准溶液(500mg/L,溶剂：1%硝酸)Nickel standard质量规格：500mg/L,溶剂：1%硝酸

IFNA8 Others Human 人 Ierferon alpha-B / IFNA8 人细胞裂解液 (阳性对照) 钾标准溶液(100μg/mL,基体:1%HCl)Potassium standard质量规格：100μg/mL,基体:1%HCl

中国仓鼠卵巢细胞(亚系*);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ2 cDNA-TGF-β Dinding Protein cDNA镨标准溶液(1000μg/mL,基体：10%HCl)Praseodymium standard质量规格：1000μg/mL,基体：10%HCl

中国仓鼠卵巢细胞-二氢叶酸还原酶缺陷型;CHO/dhFr- 喉表皮样癌细胞，HEp-2细胞 SF-9细胞，昆虫细胞系钨标准溶液(1000μg/ml,基体：0.1mol/LNaOH)Tungsten solution质量规格：1000μg/ml,基体：0.1mol/LNaOH
收到人细胞（2013年新引进）（干细胞库保藏）说明书处理方法
1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。