细胞培养过程：

冷冻保存细胞之方法：
永生化食管上皮细胞说明书冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

资源名称　永生化食管上皮细胞说明书
种属:SHEE

类型:贴壁生长

形态:上皮细胞

分离基物:食管；上皮细胞

提供形式:T25细胞培养瓶/冻存管

安全等级:2

模式菌株:未知

培养方法

培养基:90%高糖DMEM（含4mM L-谷氨酰胺、丙酮酸钠）+10%FBS

传代方法:1:3~1:6传代；2~3天换液1次。

生长条件:95%空气+5%二氧化碳 37摄氏度

存储条件:90%FBS+10%DMSO 液氮

细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞冻存步骤：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

收到永生化食管上皮细胞说明书处理方法
1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。
以下是永生化食管上皮细胞说明书的相关热销产品：
CL-0206SGC7901(人细胞)5×106cells/瓶×2草酸铵(98~101%,BR)Ammonium oxalate hydrate质量规格：98~101%,BR

MLF, 小鼠成纤维细胞5'-单1酸腺苷(>95%，BR)Adenosine-5'-monophosphate, free acid质量规格：>95%，BR

Sars结构蛋白表达株;293sars181A 人膀胱上皮细胞完全培养基 100mL硫酸铝十六水(>Aluminum sulfate, hexadecahydrate质量规格：>98%,BR

人急性早幼粒细胞;HL-60葡萄糖-6-1酸脱氢酶，硫酸铵悬浮液Glucose-6-phosphate dehydrogenase质量规格：酶活>200 NADP units/mg，BC

PPP3R1 Others Human 人 PPP3R1 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 苹果酸脱氢酶(>12,000U/ml，BC)Malate dehydrogenase质量规格：>12,000U/ml，BC
小鼠气管平滑肌细胞完全培养基 100mL盐酸丙美卡因质量规格：>98%,BRProparacaine HCl

EJ人细胞 Human bladder cancer cell line EJ 1640+10% FBSN-苄氧羰基-L-丝氨酸质量规格：>98.5%,BRZ-Ser-OH

IL36B Protein Mouse 重组小鼠 IL1F8 / IL36b 蛋白N-苄氧羰基-L-苏氨酸质量规格：0.98Z-Thr-OH

NCI-H23(人非小细胞细胞) 5×106cells/瓶×2 THP-1(单核细胞)N-苄基甘氨酸质量规格：>98.0%,BRN-Benzylglycine

CL-0383MDA-MB-436(人癌细胞)5×106cells/瓶×2扎那米韦质量规格：>98%,BR,一水物Zanamivir
SUP-B15人Ph+急淋细胞系 SUP-B15 acute lymphoblastic leukemia cell line Ph+ IMDM培养基(GIBCO)+20%FBS二苯基砜-4,4'-二氯-3,3'-二磺酸二钠(>98.0%(HPLC)(T))质量规格：>98.0%(HPLC)(T)Di Diphenylsulfone-4,4'-dichloro-3,3'-disulfonate

成纤维细胞生长因子双酚 C(>98.0%(GC))质量规格：>98.0%(GC)2,2-Bis(4-hydroxy-3-methylphenyl)propane

293FT(人胚肾细胞) 5×106cells/瓶×2 成纤维细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)4,4'-异亚丙基二苯氧基乙酸(>98.0%(HPLC)(T))质量规格：>98.0%(HPLC)(T)4,4'-Isopropylidenediphenoxyacetic Acid

人*成纤维细胞cDNAHCF cDNA四溴双酚A(>98.0%(GC)(T))质量规格：>98.0%(GC)(T)Tetrabromobisphenol A

IL1RL1 Others Human 人 IL1RL1 / ST2 ( isoform A ) 人细胞裂解液 (阳性对照) 2-乙酰氨基-2-脱氧-D-半乳糖醛酸质量规格：美国进口2-Acetamido-2-deoxy-D-galacturonic Acid
永生化食管上皮细胞说明书Ski细胞，人宫颈上皮细胞癌 人急性细胞T细胞,CCRF-CEM细胞 大鼠小肠隐窝上皮细胞;IEC-6乙酸二丙基铵(约0.5mol/L的水溶液)[离子对色谱级]IPC-DPAA (ca.  0.5mol/L in Water)质量规格：用于液相色谱-质谱的离子对试剂

BNL CL.2(小鼠胚胎肝细胞) 5×106cells/瓶×2乙酸二戊基铵(约0.5mol/L水溶液)[离子对色谱级]IPC-DAAA (ca.  0.5mol/L in Water)质量规格：用于液相色谱-质谱的离子对试剂

CPB1 Others Human 人 CPB1 / PCPB 人细胞裂解液 (阳性对照) 乙酸二己基铵(约0.5mol/L的水溶液)[离子对色谱级]IPC-DHAA (ca.  0.5mol/L in Water)质量规格：用于液相色谱-质谱的离子对试剂

中国仓鼠肺细胞;V791-辛烷磺酸钠[离子对色谱级]IPC-ALKS-8质量规格：离子对色谱用试剂

CALU Others Human 人 CALU / Calumenin 人细胞裂解液 (阳性对照) 1-壬烷磺酸钠[离子对色谱级]IPC-ALKS-9质量规格：离子对色谱用试剂