细胞培养过程：

冷冻保存细胞之方法：
新生牛鼻甲细胞说明书冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

资源名称　新生牛鼻甲细胞说明书
种属:BT

类型:贴壁生长

形态:CM1-1培养液中，贴壁，成纤维细胞，细胞形态伸展的大

分离基物:鼻甲；自发永生；Holstein，牛

提供形式:复苏形式：T25培养瓶1瓶；或者冻存形式：2ml冻存管2支，干冰费另计。

安全等级:1

模式菌株:未知

培养方法

传代方法:将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约5min取出。传代用12mL CM1-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分2~3皿培养；

生长条件:37℃，5%CO2，CM1-1培养液。CM1-1培养液：90%DMEM-H+10%FBS。DMEM-H：DMEM高糖培养液，含谷氨酰胺，含丙酮酸钠。

生长特性:2-3天换液一次，细胞周围有许多分泌物。细胞长得有点慢

存储条件:冻存则用3mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为3支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜移至液氮中保存。

细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞冻存步骤：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

收到新生牛鼻甲细胞说明书处理方法
1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。
以下是新生牛鼻甲细胞说明书的相关热销产品：
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EFNB2 Protein Rat 重组大鼠 Ephrin-B2 / EFNB2 蛋白 (His 标签)LGD-4033 LGD4033 质量规格：>98%,BR

16HBE(人上皮样细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠B细胞杂交瘤细胞;SH35-溴嘧啶5-Bromopyrimidine 质量规格：>98%

人上皮细胞;Hep-2阿螺旋霉素17-DMAG质量规格：HSP90 抑制剂，进分

LIF Others Mouse 小鼠 LIF 人细胞裂解液 (阳性对照) 大豆异黄酮Soybean isoflavones质量规格：染料木素17%-20%,异黄酮含量在40-50%
小鼠髋动脉内皮细胞;PIEC 细胞，RBL-2H3细胞 ME细胞，C57小鼠色素瘤瘤株龙胆二糖质量规格：>96%，原装进口Gentiobiose

Sars结构蛋白表达株;293 001B西洛多辛质量规格：>98%Silodosin

HA Others H1N1 甲型 H1N1 (A/Puerto Rico/8/1934) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) 西洛多辛(标准品)质量规格：>98.5%，标准品Silodosin

CL-0232TF-1(人血液细胞)5×106cells/瓶×21酸溴莫尼定质量规格：>99%,BRBrimonidine tartrate

PTK6 Others Human 人 PTK6 / Brk 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) Bacto酵母浸粉(BD原装)质量规格：Bacto;BD212750Yeast extract
人绒毛膜间充质基质细胞 Human(+/-)-氯前列醇钠盐水合物质量规格：美国进口(+/-)-Cloprostenol  salt hydrate

TNFRSF14 Others Human 人 TNFRSF14 / HVEA / HVEM 人细胞裂解液 (阳性对照) (+)-氯前列醇质量规格：美国进口(+)-Cloprostenol

人肾小球内皮细胞HRGEC头孢氨苄水合物质量规格：美国进口Cephalexin Hydrate

HA Others H10N9 甲型 H10N9 (A/duck/HongKong/562/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) 2,2-二羟基联本25克

大鼠小肠内皮细胞完全培养基 100mLTAPSO 10g/100g原装 Sigma T9269
新生牛鼻甲细胞说明书大鼠小肠隐窝上皮细胞;IEC-6 巨核细胞细胞，Dami细胞 NR8383细胞，大鼠肺泡巨噬细胞样生长因子I（57-70）Insulin-like Growth Factor I (57-70)质量规格：>95%,BR

HEC-1A, 人细胞系 Human样生长因子Ⅱ（69-84）Insulin-Like Growth Factor II(69-84)质量规格：>95%,BR

CDH5 Others Human 人 CDH5 / Cadherin-5 / CD144 人细胞裂解液 (阳性对照) 白介素-1β转化酶底物Interleukin-1β Convertase Substrate质量规格：>95%,BR

上皮细胞培养基BEpiCM-prf下钙素Katacalcin质量规格：>95%,BR

LYVE1 Others Mouse 小鼠 LYVE1 / LYVE-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 肯普肽Kemptide质量规格：>95%,BR