人细胞说明书冷冻保存细胞之方法：

冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。
细胞冻存步骤：

资源名称　人细胞说明书
种属:NCI-H929

类型:悬浮生长

形态:CM2-1培养液中，悬浮，淋巴母细胞样，圆形，大多数聚团生长

分离基物:；女性

提供形式:复苏形式：15ml离心管1支；或者冻存形式：2ml冻存管2支，干冰费另计。

安全等级:1

模式菌株:未知

应用领域:NCI-H929细胞是一株人细胞，主要研究等。

培养方法

传代方法:将培养好的悬浮细胞轻轻吹打均匀，分配至3~6个新鲜培养液皿中，轻轻摇匀后放入培养箱培养；

生长条件:37℃，5%CO2，CM2-1培养液。CM2-1培养液：90%RPMI-1640+10%FBS。RPMI-1640：1640培养液，含谷氨酰胺。

存储条件:将悬浮细胞转移至离心管中，(110g，3min)离心，离心完成后用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）重悬细胞，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。
细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞培养过程：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。
以下是人细胞说明书的相关热销产品：
PRL Others Mouse 小鼠 PRL / Prolactin 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 草酸依地普仑/草酸艾司西酞普兰（标准品）Escitalopram Oxalate质量规格：HPLC>98%,标准品

大鼠嗜碱性粒细胞性细胞;RBL-1消旋卡多曲Racecadotril质量规格：>99.5%，EP6.2

BEL-7402细胞，细胞 人口腔表皮样癌细胞,KB细胞 小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-A2消旋卡多曲（标准品）Racecadotril质量规格：HPLC>98%,标准品

C57BL/6小鼠T细胞瘤细胞;RMA乙酰螺旋霉素Acetylspiramycin质量规格：>1200u/mg,CP2005

CD226 Others Human 人 CD226 / DNAM-1 人细胞裂解液 (阳性对照) 尼罗替尼Nilotinib质量规格：>98.5%,BR
小鼠神经干细胞柴胡皂苷B2（标准品）Saikosaponin B2质量规格：HPLC≥98%，标准品

人胚胎，皮肤，肌肉;M-22 人食管上皮细胞完全培养基 100mL柴胡皂苷C（标准品）Saikosaponin C质量规格：HPLC≥98%，标准品

人间充质干细胞(脂肪)cDNAHMSC-ad cDNA柴胡皂苷D(标准品)Saikosaponian D质量规格：HPLC≥98%，标准品

TNFSF11 Others Human 人 RANKL / OPGL / TNFSF11 / CD254 人细胞裂解液 (阳性对照) 常春藤皂苷元(标准品)Hederagenin质量规格：HPLC≥98%，标准品

大鼠肝细胞;BRL 3A常春藤皂苷元Hederagenin质量规格：HPLC≥97%,BR
成纤维细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)荧光素酶(细菌)，英文名或英文缩写：Luciferase from Bacteria，级别：精制级，40u/mg，规格：5克

T/G细胞，人平滑肌细胞 KM小鼠网织细胞瘤株,LⅡ细胞 人真皮成纤维细胞-胎儿裂解物HDF-f L三钠盐三(3-磺酰苯... TPPTS,≥95.0% 63995-70-0 250MG 通用试剂

NEC(人细胞) 5×106cells/瓶×2拂橡胶 III Fluoro gum III

Caki-1(人肾透明细胞癌细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0046C4-2(人细胞)5×106cells/瓶×2 小鼠单核巨噬细胞;J774A.1ALKPHOS2COMPONENTSYSTEMS碱性嶙酸酶(含酶及稀释液)生物技术级1000 UnitsCOLD

绵羊皮肤细胞;OAR-S1硅烷偶联剂SILANE COUPLING AGENT
人细胞说明书RTN4R Others Human 人 Nogo Receptor / NOGOR / RTN4R 人细胞裂解液 (阳性对照) 乙酰辅酶A三锂盐Acetyl coenzyme A trilithium salt质量规格：95%,美国进口原装

人*上皮细胞完全培养基 100mL尿素酶,脲酶(巨豆)Urease质量规格：>45 U/mg,进分

HT1080细胞，人成纤维细胞 热带念珠菌 tTA基因修饰的小鼠(B类);F9-CAG-tTA-1A3蛋白酶VIIIProtease type VIII质量规格：美国原装进口7-15 units/mg,来源于地衣芽孢杆菌

CCL3 Protein Rat 重组大鼠 CCL3 / Mip1a 蛋白曲安奈德Triamcinolone Acetonide质量规格：>98%,BR

MDBK(牛肾细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 EphB2 / Hek5 人细胞裂解液 (阳性对照) 曲安奈德(标准品)Triamcinolone Acetonide质量规格：>98%,标准品
收到人细胞说明书处理方法
1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。