细胞培养过程：

冷冻保存细胞之方法：
小鼠微内皮细胞培养冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

资源名称　小鼠微内皮细胞培养
种属:MLMEC

提供形式:P4-5代T25细胞培养瓶

模式菌株:未知

培养方法

培养基:90%高糖DMEM+10%FBS

生长条件:95%空气+5%二氧化碳37摄氏度

生长特性:贴壁生长

存储条件:50%高糖DMEM+40%FBS+10%DMSO 液氮

细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞冻存步骤：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

收到小鼠微内皮细胞培养处理方法
1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。
以下是小鼠微内皮细胞培养的相关热销产品：
人巨细胞细胞株;Mo7e胆甲基碳酸酯(>80.0%(GC))Cholesterol Methyl Carbonate质量规格：>80.0%(GC)

TNFRSF1B Others Human 人 TNFR2 / CD120b / TNFRSF1B (aa 1-268, 196 Met/Arg) 人细胞裂解液 (阳性对照) 胆乙基碳酸酯(>94.0%(GC))Cholesterol Ethyl Carbonate质量规格：>94.0%(GC)

mCF, 小鼠*成纤维细胞胆异丙基碳酸酯(>95.0%(GC))Cholesterol Isopropyl Carbonate质量规格：>95.0%(GC)

NIH3T3细胞，NIH SWISS小鼠胚细胞 人细胞,ALVA细胞 人主动脉平滑肌细胞RNAHASMC miRNA5 μg胆丁基碳酸酯Cholesterol Butyl Carbonate质量规格：

恒河猴肾细胞;RM-2胆异丁基碳酸酯Cholesterol Isobutyl Carbonate质量规格：
上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)沙蟾毒精(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Arenobufagin

SELL Others Human 人 SELL / CD62L / L-selectin 人细胞裂解液 (阳性对照) 坦西莫司,西罗莫司脂化物质量规格：>98%,选择性的mTOR抑制剂Temsirolimus;CCI-779;NSC 683864

LTK 小鼠结缔组织纤维细胞富马酸卢帕他定质量规格：>99%,BRRupatadine fumarate

CM-H026人内皮细胞完全培养基100mL富马酸卢帕他定(标准品)质量规格：>99%,标准品Rupatadine fumarate

A549/DDP, 人肺腺癌耐药细胞株舒巴坦钠(标准品)质量规格：HPLC>98%,标准品Sulbactam
豚鼠心肌细胞;GP-H1曲拉通x-1145克2～8℃

3T6-Swiss albino细胞，胚胎成纤维细胞 人*癌细胞,CaPan-Ⅱ/Capan-2细胞 CM-M040小鼠肝窦内皮细胞完全培养基100mL缩水甘油三基录化铵(+4℃) 2,3-qpoxypropyltrimqthylcmmonium chloridq 3033-77-0

正常大鼠肾细胞;NRK对本100毫克

CDH6 Others Human 人 CDH6 / KCAD 人细胞裂解液 (阳性对照) 三号胆盐5克RT，避光

人脉络丛成纤维细胞cDNAHCPF cDNA2-脱氧胞苷-5-三1酸钠盐(+4℃)NA
小鼠微内皮细胞培养猪内皮细胞;ZYM-SVEC01远志口山酮；远志山酮IIIPolygalaxanthone III质量规格：HPLC≥98%，标准品

CCDC134 Others Human 人 CCDC134 人细胞裂解液 (阳性对照) 雷公藤定碱Wtlfordine质量规格：HPLC≥98%，标准品

透明质酸酶(含100mL酶解缓冲液) 10mL三正丁基十四烷基氯化膦Tributyltetradecylphosphonium chloride质量规格：50%grade

BGC-823人胃腺癌细胞(低分化) BGC-823 human gasic cancer cells (poorly differeiated) 1640+10% FBS罗汉果皂苷ⅢA1mogroside ⅢA1 质量规格：HPLC≥98%，标准品

IL4 Protein Human 重组人 IL4 / Ierleukin-4 蛋白罗汉果皂苷ⅡA2mogroside II A2质量规格：HPLC≥98%，标准品