细胞培养过程：

冷冻保存细胞之方法：
小鼠骨髓来源树突状细胞说明书冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃ 30~60 分钟→ （-20 ℃30 分钟*） → -80 ℃16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 长期储存。
冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase长期储存。*-20 ℃不可超过1 小时， 以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡，亦可跳过此步骤直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

资源名称　小鼠骨髓来源树突状细胞说明书
种属:DC2.4

类型:贴壁生长

形态:CM2-1培养液中，贴壁，上皮样细胞，长梭形

分离基物:LⅡ瘤株在615小鼠皮下移植后，取*原代培养，传20代后鉴定：细胞呈多角形、梭形及不规则形，胞突呈分枝状，常有大小粗细不等的胞突；经鉴定证明是小鼠树突状细胞；

提供形式:复苏形式：T25培养瓶1瓶；或者冻存形式：2ml冻存管2支，干冰费另计。

安全等级:1

模式菌株:未知

应用领域:615小鼠皮下移植100%成瘤

培养方法

传代方法:将旧培养液吸除，PBS清洗两遍后，加入6mL（/100mm皿）胰酶，在显微镜下观察，期间禁止摇晃培养皿，细胞刚有脱落时，则吸除大部分胰酶，留约0.5mL，移至培养箱消化，约1.5min取出。传代用12mL CM2-1培养液终止消化，轻轻吹打均匀细胞，后可分3~6皿培养；

生长条件:37℃，5%CO2，CM2-1培养液。CM2-1培养液：90%RPMI-1640+10%FBS。RPMI-1640：1640培养液，含谷氨酰胺。

存储条件:冻存则用6mL冻存液（90%FBS+10%DMSO）终止消化，吹打均匀，分为6支冻存管，用程序降温盒于-80℃冻存，过夜转移至液氮中保存。

细胞分类：
第一种：
是冻存产品，由氮直液接拿出，干冰运输给客户。一般不推荐这种，也较少使用这种方式，因为复苏手法对于细胞状态影响较大，一旦细胞状态不好，很难说是细胞自身不行，还是复苏没操作好；另外温度对细胞、基因功能状态影响很大，也不是细胞储存的zui好方式，快递时间也很难控制，多种因素影响产品的质量；干冰运输需要额外添加400元的运费(顺丰)。
第二种：
是我们复苏好细胞，QC通过后，T-25灌满培养基常温运输给客户，排除复苏造成影响，常温运输也对细胞影响也不大，只需加25元运费(顺丰)。
质量保证：我们的细胞株来源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等，购买到货后，由我们实验室扩增、冻存，冻存的产品全部经过QC检测，100%进口来源，100%保证5代以内，活力>95%，无细菌、真菌、支原体污染。
细胞冻存步骤：

细胞培养步骤：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

收到小鼠骨髓来源树突状细胞说明书处理方法
1、首先，观察细胞培养瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象。若有，请拍照，并及时与技术支持联系（所拍照片将作为后续服务依据）。
2、用75%酒精擦拭细胞培养瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题，部分贴壁细胞会有少量从瓶壁脱落；先不要打开培养瓶盖，将细胞置于细胞培养箱内静置培养2-4小时，以便稳定细胞状态。
3、仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如贴壁特性（贴壁/悬浮）、细胞形态、所用基础培养基、血清比例、所需细胞因子、传代比例、换液频率等。
4、静置完成后，取出细胞培养瓶，镜检、拍照，记录细胞状态（所拍照片将作为后续服务依据）；建议细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。
5、贴壁细胞：若细胞生长密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，移除细胞培养瓶内培养基，预留5ml左右继续培养，直至细胞密度达80%左右再进行传代操作，瓶盖可稍微拧松。
6、悬浮细胞：将细胞培养瓶内液体全部转移至50ml无菌离心管内，1200rpm离心5min，离心后上清培养基可收集备用，管底细胞沉淀加入5ml培养基吹打、重悬。镜检时，若细胞密度超过80%，可将细胞悬液分至2个细胞培养瓶内培养，补加培养基至5ml；若细胞密度未超过80%，将细胞悬液移至原瓶继续培养，直至细胞密度达80%左右时再进行传代操作。
以下是小鼠骨髓来源树突状细胞说明书的相关热销产品：
CLU Others Human 人 CLU / Clusterin 人细胞裂解液 (阳性对照) 氘代盐酸(50g)Deuterium Chloride质量规格：D, 99.5%  DCL 35% IN D2O

人成纤维细胞RNAHLF miRNA5 μg1酸-d3(100g )Phosphoric Acid-D3 (D, 99%)质量规格：D,99%

F13B Others Human 人 F13B / Coagulation factor XIII B chain 人细胞裂解液 (阳性对照) 氘代苯-D6(0.6ml x 10 )Benzene-D6质量规格：D,99.5%+0.05%TMS

U251 人神经细胞氘代苯-D6(0.5ml x 10 )Benzene-D6质量规格：D,99.5%

CL-0426RKO-E6(人转基因细胞)5×106cells/瓶×2氘代苯-D6(0.55ml x 10)Benzene-D6质量规格：D,99.5%+0.03%TMS
中国仓鼠卵巢细胞(亚系*);CHO-HCV-C三(1,3-二苯基-1,3-丙二酮基)(1,10-邻二氮杂菲)铕(Ⅲ)(>95.0%(T))质量规格：>95.0%(T)Tris(1,3-diphenyl-1,3-propanedionato)(1,10-phenanthroline)eur(III)

IFNAR1 Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNAR1 / IFNAR 人细胞裂解液 (阳性对照) 3-(2-苯并噻唑基)-7-(二乙氨基)(>98.0%(HPLC)(T))质量规格：>98.0%(HPLC)(T)3-(2-Benzothiazolyl)-7-(diethylamino)coumarin

虹膜色素上皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml) 3-(2-苯并咪唑基)-7-(二乙氨基)(>98.0%(T))质量规格：>98.0%(T)3-(2-Benzimidazolyl)-7-(diethylamino)coumarin

Coc2细胞，细胞 人细胞,OVAC细胞 人少突胶质前体细胞(悬浮生长)cDNAHOPC-os cDNA4,4'-双(5-甲基-2-苯并恶唑基)芪(升华提)(>96.0%(HPLC))质量规格：>96.0%(HPLC)4,4'-Bis(5-methyl-2-benzoxazolyl)stilbene (purified by sublimation)

非洲绿猴肾细胞;CV-1酞菁(以升华法化)质量规格：>98.0%(N)Phthalocyanine (purified by sublimation)
大鼠肝细胞瘤;H-4-II-EN-乙酰-D-色酸100克

SFPAC-1细胞，人*癌细胞 人舌癌细胞系,Tca8113-P60细胞 小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-D2α-溴代-γ-丁内酯 2-Bromo-4-butcnolidq 2061-1-

J82(人细胞) 5×106cells/瓶×2乙酰辅酶A25克

Promocell C-21070 Small Airway Epithelial CellGrowth Medium, 小上皮细胞生长培养基(即用型) 500ml盐酸奈乙二安5克

人脑膜细胞裂解物HMCL108-48-52.6-二甲基2,6-Lutidine
小鼠骨髓来源树突状细胞说明书IL12B Others Human 人 IL12B / P40 人细胞裂解液 (阳性对照) 正十五烷（标准品）N-PENTADECANE质量规格：内标

猪细胞;ST咖啡酸乙酯（标准品）ETHYL CAFFEATE质量规格：含量测定

VEGFC Others Rat 大鼠 VEGFC / VEGF-C (aa 108-223) 人细胞裂解液 (阳性对照) 柠檬酸无水Citric acid质量规格：>99%,AR

人气管平滑肌细胞完全培养基 100mL柠檬酸无水（标准品）Citric acid质量规格：含量测定

OCM-1A细胞，人低侵袭性脉络膜色素素瘤细胞 绿色木霉 小鼠树突状细胞细胞;DCS硫酸钾（标准品）Potassium sulfate 质量规格：含量测定