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产地 | 进口、国产 |
品牌 | 莼试 |
货号 | CP934222 |
用途 | 公司产品仅用于科研 |
包装规格 | 50T |
纯度 | 详见说明书% |
CAS编号 | |
是否进口 | 是 |
产品特征:
埃希氏菌通用探针法荧光定量PCR检测试剂盒灵敏度高:能对低拷贝或多样性模板进行定量。
特异性强:采用热启动酶的激活机制,抑制非特异性扩增 。
重复性好:扩增曲线重合度高,受干扰影响少。
扩增效率高:扩增曲线Ct值低,起峰快,效率高。产品仅供科研使用
产品名称 | 英文名称 | 货号 |
埃希氏菌通用探针法荧光定量PCR检测试剂盒 | Escherichia spp. | CP934222 |
产品及特点:
本试剂盒可用于检测食品或其他材料中是否有的成分。现代食品加工工艺极大改变了食材原有的味道、气味、色泽、纹理和质地等特性,因此传统的感官鉴别技术已经无法对食材的真伪进行准确的鉴定。同时部分食材还有致敏性,因此基于基因检测的快速灵敏的食材来源检测技术将对食品监管和安全提供重要的保障。本产品就是为满足这一需求根据 PCR 原理开发的产品,它具有下列特点:
1. 一管式操作,用户只需要提供样品即可。
2. 根据大豆热休克蛋白基因保守区域设计引物,能专一性检测出样品中的大豆成分,但不能检测其他非大豆成分。
3. 快速,整个检测过程(按一个样品计)所需时间仅为 2.0 小时。
4. 只需要普通 PCR 仪和凝胶电泳仪,无需配置贵重仪器设备。
5. 对混合样品中大豆成分的检测下限为 0.1%,对样品中大豆成分的核酸检测下限为 1.0ng/μL。
6. 本只能用于科研,足够 50 次 40uL 体系的常规 PCR。
使用方法:
一、埃希氏菌通用探针法荧光定量PCR检测试剂盒样品DNA的制备
用自选方法提取细菌样品DNA。注意:DNA纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品DNA,后面的PCR再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备O157:H7标准曲线(以10-10E6这6个10倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散病原,本产品不提供活体病毒做阳性对照,只提供没有的、可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
1. 标记6个离心管,分别为6,5,4,3,2和1号。
2. 用带芯枪头分别加入45 μL超纯水(*用带芯枪头,下同)。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用TE缓冲液或超纯水10倍梯度稀释到10E7拷贝/μL(注:请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至10E7拷贝/μL,建议每次稀释10倍,梯度稀释至10E7拷贝/μL)。
4. 在6号管中加入5 μL 10E7拷贝/μL的O157:H7阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得10E6拷贝/μL的阳性对照。
5. 换枪头,从6号管中取5 μL溶液到5号管中,充分震荡1分钟,得10E5拷贝/μL的阳性对照。
6. 换枪头,从5号管中取5 μL溶液到4号管中,重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。
7. NC管中不加任何阳性对照。
8. 从1-6号管中分别取5 μL和待测样品一起进行定量PCR(见下步),每个样品做3次重复。PCR后得到每个阳性对照稀释样品的荧光PCR Ct值,并以之为纵轴,以浓度的对数值为横轴,绘制标准曲线。
PCR反应五要素:
产品仅供科研使用参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列,就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。
设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC好随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3’端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3’端的碱基,特别是zui末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点,被扩增的靶序列zui有适宜的酶切位点,这对酶切分析或分子*很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
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