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| 产地 | 进口、国产 |
| 保存条件 | 低温冷藏 |
| 品牌 | 莼试 |
| 货号 | CS-E10164 |
| 用途 | 仅用于科研 |
| 检测方法 | 详见说明书 |
| CAS编号 | |
| 保质期 | 详见说明书 |
| 适应物种 | 详见说明书 |
| 检测限 | 1.5ng/mL~48ng/mL |
| 数量 | 28 |
| 包装规格 | 详见说明书 |
| 标记物 | 详见说明书 |
| 纯度 | 98% |
| 样本 | secreted frizzled-related protein 5 |
| 应用 | 详见说明书 |
| 是否进口 | 是 |
试剂盒性能：
人分泌型卷曲相关蛋白5ELISA试剂盒 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
灵敏度：*检测浓度小于0.1 pg/mL。
特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
重复性：板内变异系数小于10%、板间变异系数小于15%。
贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
有效期：6个月
产品名称 | 英文名称 | 检测范围 |
人分泌型卷曲相关蛋白5ELISA试剂盒 | secreted frizzled-related protein 5 | 1.5ng/mL~48ng/mL |
自备物品：
酶标仪（450nm）
高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
37℃恒温箱
自备的设备及试剂：
1. 450±10nm滤光片的酶标仪(建议仪器使用前提前预热)
2. 单道或多道微量加液器及吸头
3. 稀释样品的EP管
4. 蒸馏水或去离子水
5. 吸水纸
6. 盛放洗液的容器
| 双抗体夹心法(检测未知抗原) | 间接法(检测未知抗体) |
1、用缓冲液将抗体稀释至1-10ug/ml。在反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次。 2、加样：加一定稀释的待检样品0.05ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。 3、加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。 4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。 5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml 6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。 | 1、用包被缓冲液将已知抗原稀释至1-10ug/ml， 每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。 2、加样：加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.05ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照) 3、加酶标抗体：于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标*抗体(抗抗体)0.05ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,*一遍用DDW洗涤。 4、加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。 5、终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml 6、结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。 |
样品收集、处理及保存方法：
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
操作流程如下：
（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。
（2）酶标板置4℃，包被过夜。
（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。
（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，zui终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。
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