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大鼠高迁移率族蛋白1（HMGB1）elisa检测试剂盒说明书  Rat HMGB1 ELISA Kit
【实验用途】HMGB1，(高迁移率族蛋白1) 高迁移率族蛋白-1(HMGB1)于1 9 7 0 年代在小牛胸腺中被发现, 是一种含量丰富的核蛋白, 分子量约30 ku.近年研究发现, 当受内毒素(LPS)及细胞因子等刺激时,HMGB1即能释放到胞外, 具有细胞因子活性。所提供的elisa检测试剂盒是典型的夹心法酶联免疫吸附测定elisa检测试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为多克隆抗体。检测相抗体也为多克隆抗体，经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。
试剂准备：
1. 大鼠高迁移率族蛋白1（HMGB1）elisa检测试剂盒说明书使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25oC)，试剂不能直接在37oC溶解。
2. 标准品(冻干品)：每瓶标准品加入标准品稀释液1mL，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为2000pg/mL。准备7个稀释标准品的EP管，每个EP管中加入150μL的标准品稀释液，如图所示依次倍比稀释成不同的梯度， 标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。
3. 浓洗涤液：用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL，进行30倍稀释。

试剂配制：
1、大鼠高迁移率族蛋白1（HMGB1）elisa检测试剂盒说明书酶联板（Assay plate ）：一块（96孔或者48孔）。
2、标准品（Standard）：2瓶（冻干品）。
3、样品稀释液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。
4、生物素标记抗体稀释液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
6、生物素标记抗体（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7、辣根过氧化物酶标记亲和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
8、底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
9、浓洗涤液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
10、终止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
注意事项：
1. 大鼠高迁移率族蛋白1（HMGB1）elisa检测试剂盒说明书试剂盒使用前请保存在2-8℃。复溶后的标准品若未用完，请废弃。
2. 微量试剂运输中颠簸和可能的倒置，会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请1000转/分离心1分钟，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。
3. 从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶,属于正常现象，微加热至40℃使结晶完全溶解后再配制洗涤液。
（加热温度不要超过50℃）使用时洗涤液应为室温。
4. 不同批号的试剂盒组份避免混用（洗涤液和反应终止液除外）。
5. 充分轻微混匀对反应结果尤为重要，zui好使用微量振荡器(使用zui低频率)，如无微量振荡器，可在反应孵育前手工轻轻混匀。
6. 在试验中标准品和样本检测时建议作双孔检测。
7. 试验中所用的试管和吸头均为一次性使用，严禁在不同的液体之间混用！否则将影响试验结果。
8. 试验中请穿着试验服并带乳胶手套做好防护工作。特别是检测血液或者其他体液标本时，请按国家生物试验室安全防护条列执行。
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