兔牙周膜成纤维细胞接受后的处理:
1)收到细胞后,请检查是否漏液,如果漏液,请拍照片发给我们。
2)请先在显微镜下确认细胞生长状态,去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。
3)弃去T25瓶中的培养基,添加6ml本公司附带的完全培养基。
4)如果细胞长满(90%以上)请及时进行细胞传代,传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。
5)接到细胞次日,请检查细胞是否污染,若发现污染或疑似污染,请及时与我们取得联系。
在确认细胞生长状态良好且无污染后,接下来是细胞传代的关键步骤。首先,准备必要的实验器材,包括无菌的吸管、离心管、培养皿以及适量的PBS缓冲液和胰蛋白酶。确保所有器材都已消毒并置于无菌操作台中。
6)进行细胞传代时,轻轻吸去T25瓶中的旧培养基,注意避免吸到细胞层。随后,加入适量预热的PBS缓冲液轻轻洗涤细胞表面,以去除残留的血清和死细胞,洗涤两次后弃去PBS。
7)紧接着,加入适量的胰蛋白酶(具体量根据细胞种类和密度调整),轻轻摇晃使胰酶均匀覆盖细胞层,随后将培养瓶放入37℃培养箱中消化约2-5分钟,期间可轻轻拍打培养瓶壁帮助细胞脱落。待细胞变圆、间隙增大时,立即加入含血清的完全培养基终止消化。
8)使用吸管轻轻吹打细胞悬液,确保细胞完全分散成单个状态。随后,将细胞悬液转移至离心管中,以适宜的转速(通常为1000-1500rpm)离心5分钟,以去除胰酶和细胞碎片。
9)离心结束后,弃去上清液,加入适量的完全培养基重悬细胞。根据实验需要,可将细胞按一定比例(如1:2或1:3)接种到新的培养皿或培养瓶中,并轻轻摇晃使细胞均匀分布。最后,将培养皿或培养瓶置于37℃、含5% CO2的恒温培养箱中继续培养。
通过以上步骤,可以确保兔牙周膜成纤维细胞在传代过程中保持活力并避免污染,为后续的实验研究提供高质量的细胞样本。