人MxA蛋白ELISA试剂盒操作流程如下:
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。样本孔中加入待测样本50μL。空白孔不加。
3. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅孵育。
4. 洗板:扣去孔内液体,300μL/well加入1×washing buffer。停留1分钟后弃去孔内液体。重复3次,每一次在滤纸上扣干。
5. 加样:100μL/well加入稀释后的Cytokine standard至标准品孔,100μL/well加入样品至样品孔,100μL/well加Dilution buffer R (1×)入空白对照孔。混匀后盖上封板膜,室温孵育。
6. 再次洗板:扣去孔内液体,300μL/well加入1×washing buffer。停留1分钟后弃去孔内液体。重复5次,在滤纸上扣干。
7. 显色:每孔加入显色剂A、B各50μL,混匀,37℃孵育15-25分钟,观察到标准品孔和样本孔颜色发生变化。
8. 终止反应:每孔加入终止液50μL,混匀。
9. 测量:用酶标仪在450nm波长处测量各孔的光密度值,记录数据。
10. 根据标准品和样本的光密度值,按照试剂盒附带的说明书进行数据处理和结果分析。
注意事项:
1. 操作时要严格遵守实验室安全规定和个人防护措施。
2. 在进行试剂盒操作前,应按照说明书要求彻底混合或管内搅拌试剂。
3. 所有试剂和样品均应在4℃下储存,并在使用前充分恢复到室温。
在完成人MxA蛋白ELISA试剂盒的操作后,应按照实验室安全规定正确处理废弃物。同时,为确保实验结果的准确性,建议对每个样本进行多次检测并取平均值。如有任何疑问或需要进一步了解试剂盒的性能和注意事项,建议查阅相关文献或咨询专业人士。