人脐动脉组织提取物培养步骤

人脐动脉组织提取物培养步骤:
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%*培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

Aconitase 1 铁调节蛋白1抗体
ATAD3A 三磷酸腺苷酶家族蛋白3A抗体
APOJ 载脂蛋白J抗体
APOH 载脂蛋白H抗体
ART4 二磷酸腺苷核糖基转移酶4抗体
AKIRIN2 AKIRIN2蛋白抗体
ARL8B ADP核糖基化样因子8B抗体
ATAD2 三磷酸腺苷酶家族蛋白2抗体
AKIRIN1 AKIRIN1蛋白抗体
ASZ1 锚定蛋白样蛋白1抗体
Adenylate kinase 2 腺苷酸激酶2抗体
Acrosin 精子顶体前体蛋白抗体
AIM1L 黑色素瘤缺失样蛋白1抗体
AER61 未知糖基化转移酶AER61抗体
FE65 铁蛋白Fe65抗体
ARHI 抑癌基因ras同源家族1抗体
AP2 alpha 转录激活蛋白2α/TFAP2α/AP-2α抗体
ANP 心钠素抗体
AARS2 丙氨酰tRNA合成酶2抗体
AKAP12 丝氨酸抑制蛋白激酶C底物抗体
Alpha-Synuclein 核突触蛋白α抗体
APG4B 自噬相关蛋白4B抗体
ADAMTS12 整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-12抗体
alpha Actinin 4-Loading Control α-辅肌动蛋白4(内参)抗体
Alkaline Phosphatase 碱性磷酸酶抗体
AU1 tag AU1 tag标签抗体