刚果锥虫探针法荧光定量PCR试剂盒检测样品RNA的抽提

刚果锥虫探针法荧光定量PCR试剂盒检测样品RNA的抽提:

①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。

②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。

③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。

④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。

⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。

⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其完全溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。

 育亨宾 英文名称： Yohimbine CAS号： 146-48-5 分子式： 354.45 分子量： C21H26N2O3
 罗通定 英文名称： Luo Tongding CAS号： 10097-84-4 分子式： 355.427 分子量： C21H25NO4
 七叶皂苷钠 英文名称： Seven leaves saponins sodium CAS号： 20977-05-3 分子式： 分子量：
 人参皂苷Rg3 英文名称： Ginsenoside Rg3 CAS号： 38243-03-7 分子式： 785.02 分子量： C42H72O13
 人参皂苷Rf11 英文名称： Ginsenoside Rf11 CAS号： sdfsg 分子式： 分子量：
 匹莫林 英文名称： Pi Molin CAS号： 2152-34-3 分子式： 176.17 分子量： C9H8N2O2
 多巴胺盐酸盐 英文名称： Dopamine hydrochloride CAS号： 62-31-7 分子式： 189.64 分子量： C8H12ClNO2
 盐酸多塞平 英文名称： Doxepin hydrochloride CAS号： 1229-29-4 分子式： 315.84 分子量： C19H22ClNO
 盐酸多沙普仑 英文名称： Do Schaap Leon hydrochloride CAS号： 7081-53-0 分子式： 414.97 分子量： C24H31ClN2O2
 盐酸苯海索 英文名称： Trihexyphenidyl hydrochloride CAS号： 52-49-3 分子式： 224.6 分子量： C7H9ClO6
 盐酸苯海拉明 英文名称： Diphenhydramine hydrochloride CAS号： 147-24-0 分子式： 291.82 分子量： C17H22ClNO
 氢溴酸加兰他敏 英文名称： Galanthamine hydrobromide CAS号： 1953/4/4 分子式： 368.27 分子量： C17H22BrNO3
 马来酸氯苯那敏 英文名称： Maleic acid - - - - - - - - - - CAS号： 113-92-8 分子式： 390.86 分子量： C20H23ClN2O4