正常人食管鳞状上皮细胞细胞培养步骤

正常人食管鳞状上皮细胞细胞培养步骤：
产品仅用于科研一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备MEM培养基(MEM:GIBCO,货号11095-080)，85%；北美胎牛血清(United States，GIBCO，货号16000-044)，15%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%完全培养基，10%DMSO，现用现配。液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，弃去培养基后加入少量胰酶，细胞变圆脱落后，加入约1ml含血清的培养基后加入冻存管中，再添加10%DMSO后进行冻存。

莪术烯醇 Curcumenol 19431-84-6
呋喃二烯 Furanodiene 19912-61-9
莪术烯 Curzerene 17910-09-7
新莪术二酮 Neocurdione 108944-67-8
莪术呋喃酮 Curzerenone 20493-56-5
N-反式香豆酰酪胺 N-pcoumaroyltyramine 36417-86-4
棍掌碱 Coryneine 7224-66-0
管花苷A Tubuloside A 112516-05-9
管花苷B Tubuloside B 112516-04-8
甘露三糖 Manninotriose 13382-86-0 
桂二萜醇 Cinnzeylanol 62394-04-1
构树宁A Broussonin A 73731-87-0
E-藁本内酯 E-Ligustilide
格兰地新 Groenlandicine 38691-95-1
旱莲苷A Ecliptasaponin A 78285-90-2
旱莲苷D Ecliptasaponin D 206756-04-9
红花素 Carthamidin 479-54-9
华蟾毒它灵 Cinobufotalin 1108-68-5
环氧泽泻烯 Alismoxide 87701-68-6
黄柏内酯 Obaculactone 1392-24-1
黄芪异黄烷苷 Isomucronulatol-7-O-glucoside 94367-43-8
4-甲基伞形酮 4-Methylumbelliferone 90-33-5
甲基麦冬高黄酮A Methylophiopogonone A 74805-90-6
原儿茶醛 Protocatechualdehyde 139-85-5
异莲花掌苷 Isolindleyin 87075-18-1