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蜡样芽胞杆菌探针法荧光PCR检测试剂盒操作流程

发表时间:2022-09-27
蜡样芽胞杆菌探针法荧光PCR检测试剂盒操作流程:

1. 整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器 、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。

2. 为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。

3. 每次实验应该设置阴、阳性对照。

4. 试剂盒所有试剂在使用前应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。

5. 试剂盒内所配阴性和阳性对照在一次使用前应全部转移至标本准备区,并单独存放。

6. 为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。

7. 仪器 扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。

8. ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。

9. 实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。

脑钠通道蛋白2抗体
脑钠通道蛋白4抗体
小肠钠通道蛋白5抗体
APXL蛋白抗体
酸敏感离子通道蛋白3抗体
天门冬氨酸β羟化酶抗体
精氨酸加压素受体2抗体
细胞骨架肌动蛋白样蛋白3抗体
膜粘连蛋白8抗体
水通道蛋白8抗体
锚蛋白重复结构域蛋白40抗体
凋亡抑制因子5抗体
水通道蛋白-3抗体
载脂蛋白D抗体
丁酰基辅酶A合成酶3抗体
脂肪细胞源性亮氨酸氨基肽酶抗体(血管内皮细胞生长因子诱导蛋白)
线粒体凋亡诱导因子2抗体
ABL2蛋白抗体
血管紧张素转换酶ACE1抗体
血管紧张素转换酶2抗体
Acinus抗体
醋酸激酶1抗体
促肾上腺皮质激素(1-39)抗体
促肾上腺皮质激素ACTH(18-39)抗体
促肾上腺皮质激素ACTH (7-23)抗体
活性依赖的神经保护肽抗体
α1酸性糖蛋白1/类粘蛋白1抗体
α1酸性糖蛋白2抗体(类粘蛋白2)
磷酸化水通道蛋白2抗体
细胞酪氨酸转氨酶抗体



试剂准备

1. DNA模板

2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)

3.10×PCR Buffer

4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5.Taq酶操作步骤 

1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。

      10×PCR buffer             5μl

      dNTP mixl                 4μl

       引物1(10pM)               2μl

       引物2(10PM)              2μl

       Taq酶(2U/μl)            1μl

      DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl

      加ddH2O至               50 μl

    视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。

2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。

3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。

4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。

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