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蛋白酶抑制剂混合物(用于植物)操作步骤

发表时间:2022-06-08
蛋白酶抑制剂混合物(用于植物)操作步骤:
1. 匀浆处理:a.组织 将组织在液氮中磨碎,每50-100mg组织加入1ml TRIzol,用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过TRIzol体积10℅。
b.单层培养细胞 直接在培养板中加入TRIzol裂解细胞,每10cm2面积(即3.5cm直径的培养板)加1ml,用移液器吸打几次。TRIzol的用量应根据培养板面积而定,不取决于细胞数。TRIzol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。
c.细胞悬液 离心收集细胞,每5-10×106动物、植物、酵母细胞或1×107细菌细胞加入1ml TRIzol,反复吸打。加TRIzol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。
2.将匀浆样品在室温(15-30℃)放置5分钟,使核酸蛋白复合物完全分离。
3.可选步骤:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或胞外物质(肌肉,植物结节部分等)可于2-8℃10000×g离心10分钟,取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜,多糖,高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织时,上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。
5. 每使用1ml TRIzol加入0.2ml,剧烈振荡15秒,室温放置3分钟。
6. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。

7. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml TRIzol加入0.5ml异丙醇,室温放置10分钟。

人白细胞分化抗原30(CD30)ELISA Kit,48T/96T 
小鼠白细胞分化抗原30(CD30)ELISA Kit,48T/96T 
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人睫状神经营养因子(CNTF)ELISA Kit,48T/96T 
小鼠睫状神经营养因子(CNTF)ELISA Kit,48T/96T 
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鸡可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA Kit,48T/96T 
人可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA Kit,48T/96T 
小鼠可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA Kit,48T/96T
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兔子可溶性血管内皮细胞蛋白C受体(sEPCR)ELISA Kit,48T/96T
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