如何选择同型对照?
? 一般选择与一抗的成分完全相同种属来源、相同亚型和亚链、相同荧光标记的抗体,比如抗人的CD56 FITC标记的抗体,亚型是Mouse IgG1,κ,那么它的同型对照应该是FITC标记的Mouse IgG1,κ。
? 如果没有找到适合的同型对照,在保持来源相同、荧光标记相同、免疫球蛋白类别相同条件下,优先选择的顺序是亚链不同--亚型不同--相同类别:比如,某抗体的来源是Mouse IgG2а,κ。如果在同型对照表里找不到完全相同的同型对照,那么优先选择相同荧光标记Mouse IgG2а为同型对照;如果也没有找到Mouse IgG2а,那么优先选择相同荧光标记的Mouse IgG2b作为同型对照;如果最后还是没有找到Mouse IgG2b,那么选择相同荧光标记的Mouse IgG2作为同型对照。
? 如果是抗体的组合形式,纯化的一抗+荧光标记的二抗,那么应该选择一抗的同型对照。比如CD86的纯化抗体,亚型是Mouse IgG1,κ,二抗是PE标记的抗小鼠IgG1,那么它的同型对照是纯化的Mouse IgG1,κ。染色方式如下:样本管,纯化的CD86+PE标记的抗Mouse IgG1(二抗)+样本;同型对照管,纯化的同型对照+PE标记的抗Mouse IgG1(二抗)+样本。